Síntese, Caracterização e Atividade Biológica de Alqui 2-azido-2,3-didesoxi-α-D-lixo-hexepiranosídeo contra as células NCL-H292.

ISBN 978-85-85905-10-1

Área

Química Orgânica

Autores

J. F. S. da S., A. (UFRPE) ; R.f. F., J. (UFRPE) ; C. G. M., G. (UFPE)

Resumo

Neste trabalho realizamos a síntese e a caracterização de uma série de 4 (quatro) novos azidos-glicosídeos a partir do tri-O-acetil-D-glucal em cinco etapas reacional. Também foi testada a atividades antiproliferativa frente três linhas de células de humana diferentes. As estruturas dos compostos sintetizados foram elucidadas através de técnica de IV e de RMN de 1H e de 13C

Palavras chaves

Azido; Elucidação; Atividade Antiproliferati

Introdução

A procura e o desenvolvimento de novos agentes antineoplásicos mais efetivos e menos tóxicos tem sido alvo de intensos estudos. Cerca de 60% dos quimioterápicos utilizados no tratamento do câncer provêm de fontes naturais, como plantas, micro-organismos e organismos marinhos (MAN, 2002). Aminoaçúcares são uma classe de compostos amplamente distribuídos nos seres vivos e também ocorrem como constituintes de glicoproteínas (STURGEON, 1988), glicopipídeos e proteoglicans (KENNEDY,1982), Além disso, aminoaçúcares são unidades essenciais de vários antibióticos tais como aminoglicosídeos, antraciclinas, e antibióticos ciclopeptídeos (MALANS,1988), . Diversos aminoaçúcares são disponíveis comercialmente. A vicenisamina, 2,4,6-tridesoxi-4-N-metil-amino-D-ribo- hexopiranose, tem sido encontrado como um resíduo de açúcar no antitumor- antibiótico, vicenisatina (ARAI,1998), que é a macrocíclica lactânica. Seccharosamine é um resíduo de aminoaçúcar presente nos sacchoromicins A e B, dois antibióticos do tipo glicosídeo-heptadecassacarídeo isolados de uma espécie Saccharothrix (KONG, 1998). A adição nucleofílica 1,4 de um íon carbânion estabilizado à dupla ligação ativada de um composto carbonílico α,β-insaturado, denominada adição de Michael, tem uso apreciável na química dos carboidratos e constitui uma importante metodologia para funcionalização de monossacarídeos (RAVIDAN, 2000). Exemplos diferentes de adição de Michael de nitrogênio nucleofílico incluindo aminas a hex-2-enose e 3-nitro-hex-2-enopiranosideo têm sido descrito. Logo o objetivo deste trabalho é sintetizar, caracterizar e testar a atividade biológica de alquil 2-azido-2,3-didesoxi-α-D-lixo- hexopiranosídeo.

Material e métodos

Nas reações, utilizou-se reagentes e solventes, na sua forma comercial, p.a. O acompanhamento das reações foi feito através de cromatografia em camada delgada (ccd), onde o solvente usado para correr a placa foi CH2Cl2/AcOEt (9:1). Para cromatografia em coluna utilizamos sílica-gel 60 (Merck, 70 – 230 mesh). Os espectros de RMN 1H e RMN 13C foram obtidos em espectrofotômetro VARIAN modelo Unity Plus (300 MHz e 75MHz), usando CDCl3 como solvente e tetrametilsilano como padrão interno. Espectros de infravermelho (IV) foram obtidos em espectrofotômetro de IV com Transformada de Fourier no instrumento BRUKER Modelo IFS 66, em pastilha de KBr. No teste de atividade biológica foi utilizada três linhas de células de humana diferentes obtidas do Banco de células do Rio de Janeiro, tendo sido cultivadas em meio RPMI 1640 ou DMEN, suplementados com 10 % de soro fetal bovino e 1 % de antibióticos, mantidas em estufa a 37 C e atmosfera contendo 5% de CO2. As amostras foram diluídas em DMSO puro estéril e testadas na concentração de 25 µg/mL para substâncias puras. Em seguida, foram adicionados 25 L da solução de MTT (sal de tetrazolium), e as placas foram incubadas por 3h. A absorbância foi lida após dissolução do precipitado com DMSO puro em espectrofotômetro de placa a 595nm. Os experimentos foram analisados segundo suas médias e respectivos desvio no programa GraphPad Prism. Cada amostra foi testada em duplicata.Uma escala de intensidade foi utilizada para avaliar o potencial citotóxico das amostras testadas. Amostras sem atividade (1 a 20% de inibição), com pouca atividade (inibição de crescimento celular variando de 20 a 50%), com atividade moderada (inibição de crescimento celular variando de 50 a 70%) e com muita atividade (inibição de crescimento variando de 70 a 100%)

Resultado e discussão

Inicialmente foi realizada a síntese de glicosídeos 2,3-insaturados a partir do tri-O-acetil-D-glucal e alguns alcoóis . A reação de O-glicosidação do tri-O- acetil-D-glucal 1 com o alcoóis 2a-d, foi realizada usando o método de TOSHIMA et al, (1995), onde obtive-se os glicosídeos 3a-d. Posteriormente os compostos 3a-d foi hidrolisado conforme procedimento descrito na literatura (FRASER-REID et al, 1973), para obtenção dos compostos 4a-d e em seguida foi realizada uma oxidação alílica de 4a-d utilizando MnO2 (FERRIER et aL, 1969), (HOLDER et al, 1973,) o qual forneceu os compostos 5a-d. De pose dos compostos 5a-d reagimos os mesmos, separadamente, com azida de sódio em ácido acético, a temperatura ambiente para obtenção dos compostos 6a-d. Decidimos submeter a mistura reacional a reação de redução utilizando borohidreto de sódio em metanol, por 30 minutos, o qual forneceu os compostos 7a-d, que foram purificados por cromatografia em coluna (Esquema 1). Os compostos foram obtidos com rendimento que variam de 80 a 95%. Todos os compostos da série foram caracterizados por espectroscopia de IV e RMNN de 1H e 13C. A análise de IV dos compostos apresentou absorção de (OH) em aproximadamente 3403, (N3) em 2108 e (- C-O-) em 1027 cm-1 (Figura 1). Os dados de RMN 1H do composto 7a mostrou um sinal na região de δ 4,90 ppm como um simpleto referente ao próton anomérico H-1. O multipleto largo em δ 4,28 ppm (J4,3eq= 7,0 Hz, J4,5ax= 4,8 Hz) foi designado para o H-4. O próton H-2 foi atribuído ao simpleto largo em δ 3,82 ppm. Os H-3ax e H-3eq tiveram deslocamento na faixa de δ 1,98-2,19 Todos os compostos da série de nossa síntese de Alqui 2-azido-2,3-didesoxi-α-D- lixo-hexepiranosídeo apresentaram taxas de inibição contra células NCL-H292.

Conclusões

Em resumo, descrevemos a síntese e caracterização quatro alqui 2-azido-2,3- didesoxi-α D-lixo-hexepiranosídeo. Os produtos finais foram obtidos em tempos curtos e com rendimentos moderadados. Os compostos 7a-d foram testados contra três linhas de células humanas, onde apenas de compostos 7b e 7d exibiram boas atividades antiproliferativas contra as celulares de tumorais NCL H-292.

Agradecimentos

Referências

[1] MANN, J. Nat Rev Cancer 2, 2002, 143.
[2] STURGEON, R.J. In Glycoproteins and Glycogen, (Ed. J.F. Kennedy), Carbohydrate Chemistry, Claredon Press, Oxford, 1988, pp. 263-302.
[3] KENNEDY, J.F.K.; WHITE, C. A. In The Glycominoglycans and Proteoglycans, (Ed. Kennedy, J.F.K.), Carbohydrate Chemistry, Claredon Press, oxford, 1982, pp. 303-341.
[4] HAUSER, F.M.; ELLENBERGER, S.R. Chem. Rev., 1986, 86, 35-67.
[5] MALANS, A.K. In The Carbohydrate-Containing Antibiotics, (Ed. J.F. Kennedy), Carbohydrate Chemistry, Claredon Press, Oxford, 1988, pp. 73-133.
[6] ARAI, H.; MATSUSHIMA, Y.; EQUCHI, T.; SHINDO, K.; KAKINUMA, K. Tetrahedron Lett., 1998, 39, 3181.
[7] KONG, F.; ZHAO, N.; SIEGEL, M.M.; JANOTA, K.; Ashcroft, J.S.; Koehn, F.E.; Borders, D.B.; Carter, G.T. J. Am. Chem. Soc. 1998, 120, 13301.
[8] RAVIDAN, B.; SAKTHIVEL, K.; C. G.; SURESH; PARTHAK., T.; J. Org. Chem., 2000, 65, 2637.
[9] BERRIDGE, M. V., TAN, A. S., McCOY, K. D., WANG, R. The Biochemical and Cellular Basis of Cell Proliferation Assays that Use Tetrazolium Salts. Biochemica, 4: 14-19, 1996.
[10] K. TOSHIMA, T. ISHIZUKA, G. MATSUO, M. NAKATA, Synlett, 306, 1995.
[11] FERRIER, R. J. e PRASAD, N. J. Chem. Soc. (C) 1969, 570.
[12] HOLDER, N. L;. FRASER-REID, B. Can. J. Chem., 1973, 51, 3357.
[13] FRASER-REID, B.; WALK, D. L.; TAM, S. Y-K.; HOLDER, N. L. Can J. Chem., 1973, 51, 3950.