ISBN 978-85-85905-10-1
Área
Iniciação Científica
Autores
Santos, A.L. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS) ; Silva, K.F.S. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS) ; Santos, I.A.P. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS) ; Lopéz, A.M.Q. (UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS)
Resumo
Metabólitos de antibióticos - inclusive oriundos de processos industriais, podem causar desequilíbrio e mutações em populações bacterianas. Isso é relevante considerando-se que a qualidade nos resultados da biocorreção de efluentes depende das populações em co-metabolismo. Verificou-se o espectro de biodegradação de vários substratos orgânicos recalcitrantes ou não por bactérias saprófitas de solo de Mata Atlântica (Maceió-AL), bem como sua resistência ao antagonismo de outros microrganismos e sua tolerância a três dos herbicidas mais usados em cana-de-açúcar. A seleção definitiva de três isolados aptos a compor consórcio de biaumentação (efluentes agrícolas) dependeu de sua identificação - completada após teste antimicrobiano. Concluiu-se tratar de três espécies de Corynebacterium.
Palavras chaves
Tratamento de resíduos; biodegradação; antimicrobianos
Introdução
Segundo estimativa da ANVISA (2005), no Brasil, 20% de toda a produção farmacêutica é descartada, sendo que algumas classes de fármacos preocupam mais em relação aos seus resíduos, pois ou causam lise celular ou mutações e teratogenicidade, sendo os interferentes endócrinos e os antimicrobianos as substâncias que mais preocupam (BRASIL, 2004), e no tocante a estes últimos, o problema é o potencial desenvolvimento de bactérias resistentes no meio ambiente. Essa situação afeta, por exemplo, a prospecção de microrganismos com capacidade de síntese e/ou degradação de moléculas eficientes para uso racional dos recursos naturais. Devido a resistência que as bactérias podem passar a manifestar, por mutações naturais ou induzidas face ao contato constante com agentes químicos, é necessária uma padronização do teste de disco-difusão e um monitoramento padronizado. Diante do exposto, o propósito deste trabalho foi testar a suscetibilidade de três espécies isolados bacterianos de solo da Mata Atlântica de Maceió (AL), capazes de metabolizar vários substratos orgânicos (celulose, hemicelulose, proteínas, hidrocarbonetos, fenóis, ureia, etc) e três dos principais herbicidas (Diuron, Sulfentrazone e Isoxaflutole) utilizados em lavouras de cana-de-açúcar, a sete antimicrobianos distintos com ação sobre diferentes alvos, isto é, inibindo a síntese de peptidiogligano da parede celular, ou a síntese proteica, ou, ainda , interferindo na síntese de ácidos nucleicos se absorvidos. O objetivo foi completar a identificação de tais espécies e conhecer em que tipo de efluente poderiam ser utilizadas.
Material e métodos
Os isolados bacterianos submetidos a avaliação da sensibilidade aos antimicrobianos foram originalmente obtidos de solo de Mata Atlântica de Maceió (MA-M), e estavam depositados na bacterioteca do LBPMA-UFAL, sendo selecionados por testes preliminares de degradação de diferentes monossacarídeos, celulose, amido, ureia, ácidos fenólicos, e diferentes triglicérides e hidrocarbonetos, além de apresentarem alta tolerância a três herbicidas de uso frequente em cultivo de cana de açúcar (Tabela 1) quando estes foram a única fonte de Carbono presente (até a concentração de 1000 µg.mL-1) em meio mínimo (JE sólido), após 5 dias de incubação (escuro, 28±2°C). Tais herbicidas são: Diuron (3 - (3,4 - diclorofenil) 1,1- dimetiluréia), Sulfentrazone (2',4'-dicloro-5'-(4-difluoro-metil-4,5- dihidro-3-metil-5-oxo-1H-1,2,4-triazol-1-il) metano-sulfonanilida) e Isoxaflutole (5- ciclopropil-1,2-oxazol-4-il,α,α,α-trifluoro-2-mesil-p-tolil cetona). A metodologia de avaliação antimicrobiana foi o clássico teste de Kirby & Bauer, utilizando discos de papel filtro embebidos em diferentes antibióticos (OFX= Ofloxacina; TET= Tetraciclina; CFD= Cefadroxil; NAL= Ácido Nalidixo; TAC= Ticarcilina; CLA= Claritromicina; CLI2= Clindamicina 2), sendo os mesmos adquiridos comercialmente para tal uso, e os cultivos em Agar Nutriente com os discos incubados por 24 h-72 h (escuro, 34 ±2°C). Como dois isolados eram Gram positivos, não foram submetidos aos discos de antibiótico NAL e TAC, predominantemente usados para Gram negativos, e um terceiro isolado não foi submetido a inibição por CLA e CLI2, uma vez que são indicados predominantemente para Gram positivos.
Resultado e discussão
Quanto a tolerância dos microrganismos a diferentes agroquímicos como única
fonte de Carbono (Tabela 1) em diferentes concentrações (0-1000 µg.mL-1) em
meio mínimo sólido (JE), todos os isolados apresentaram tolerância
satisfatória aos herbicidas sulfentrazone e isoxaflutole nas concentrações
testadas. No tocante a concentração de 1000 µg.mL-1 de Diuron, o isolado
MA64M só apresentou crescimento discreto, talvez em função das parcas
reservas intracelulares de energia. Todos os demais isolados foram bem
tolerantes ao Diuron em todas as concentrações testadas. Os três isolados
bacterianos tolerantes a Diuron, Sulfentrazone e Isoxaflutole em
concentrações até 1000 µg.mL-1 (Tabela 1), capazes de degradar ureia, ácidos
fenólicos, celulose, amido e diferentes triglicérides, apresentaram 100% de
resistência aos antibióticos testados (OFX= Ofloxacina; TET= Tetraciclina;
CFD= Cefadroxil; NAL= Ácido Nalidixo; TAC= Ticarcilina; CLA= Claritromicina;
CLI2= Clindamicina 2), após 24 h de incubação (escuro, 34±2ºC ) em meios
contendo discos com concentrações específicas dos mesmos (Tabela 2).
+ = tolerante, +/- = pouco tolerante (crescimento inibido)
+ = houve inibição ; - = não houve inibição
Conclusões
Os três isolados bacterianos obtidos de solo de Mata Atlântica de Maceió-AL, com capacidade de degradar diferentes substratos orgânicos recalcitrantes ou não, mostraram-se bastante tolerantes aos 3 herbicidas de uso mais frequente em cultivos de cana de açúcar. Após diferentes testes morfofisiológicos e bioquímicos, verificou-se que os três apresentaram 100% de suscetibilidade aos diferentes antibióticos testados nos distintos alvos de atuação, sendo que associando-se esse resultado aos das provas bioquímicas clássicas de identificação presuntiva, concluiu-se serem espécies do gênero Corynebac
Agradecimentos
CNPq; S.A. Usina Coruripe Açúcar e Álcool.
Referências
ANVISA. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução RDC 306/04. Disponível em: http://e-legis.anvisa.gov.br/leisref/public/showAct.php?id=13554. Acesso em: 25/05/2014.
Brasil, Ministério da Saúde. Secretaria de Gestão de Investimentos em Saúde. Manual plano de gerenciamento de resíduos de serviços de saúde (PGRSS). Goiás, 2004, 74p.
Boehm R. Effects of residues of antiinfectives in animal excrements upon slurry management and upon soil. Dtsch tier¨arztl Wschr 1996;103:264]268.33.
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