IDENTIFICAÇÃO DE TETRACICLINA EM MEDICAMENTOS VETERINÁRIOS A BASE DE ÁCIDO ASCÓRBICO UTILIZANDO CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE RÁPIDA EFICIÊNCIA ACOPLADA A ARRANJO DE FOTODIODOS

ISBN 978-85-85905-10-1

Área

Química Analítica

Autores

Cabral, A.M. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE) ; Moura, M.F.V. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE) ; Silva, D.R. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO NORTE)

Resumo

Este trabalho desenvolve um método para identificação de Tetraciclina (TC) e epi – tetraciclina (epi-TC) em medicamentos veterinários a base de ácido ascórbico (AA) e ácido ascórbico (AA), L-ascórbico (LAA) e D-iso-ascórbico (DIAA), utilizando cromatografia líquida de ultra eficiência com arranjo de fotodiodos (UFLC-DAD). A separação cromatográfica foi realizada em modo gradiente utilizando coluna de fase reversa de C8 (4,6 mm x 25 cm, 5 μm). A composição da fase móvel de Água: Acetonitrila foi 80:20 (v/v) e fluxo de 1 mLmin-1. Considerando, resolução de (0,80 – 0,96) e seletividade de (2 – 2,44) em nível de confiança de 95 %, os resultados mostraram que o método é adequado para identificação de TC em 1,6 min, epi-TC (1,5 min), LAA (1,38 min) e DIAA (1,45 min).

Palavras chaves

UFLC-DAD; Ácido Ascórbico; Tetraciclina

Introdução

O controle de qualidade dos fármacos de uso veterinário é essencial para garantia da sua eficiência terapêutica, estabilidade e garantia da ausência de resíduos em alimentos expostos ao consumo humano. Os fatores que alteram a qualidade dos medicamentos são: temperatura de armazenagem, luz, umidade, radiações ionizantes e os tipos de embalagens (EUROPEAN COMMISSION, 2006; MINISTÉRIO DA AGRICULTURA PECUÁRIA E ABASTECIMENTO, 2012). A associação de antioxidantes a fórmulas contendo tetraciclinas é comum, quando deseja-se prevenir reações que ocorrem em medicamentos deste grupo. Na indústria farmacêutica existem muitas aplicações técnicas prevenir mecanismos oxidativos uma delas é a adição do ácido ascórbico, principalmente quando é utilizado para compensar perdas no armazenamento, aumentando a data de validade e também para preservar a integridade do produto refletindo na sua qualidade (BAJAJ., SINGLA., SAKHUJA, 2012). A tetraciclina como base livre é insolúvel em água, para ser dissolvida e formar uma solução é necessário deve ser convertida em sal do seu ácido (cloridrato de tetraciclina), porém a solução não é considerada estável durante um determinado tempo, desta maneira o ajuste de pH é necessário (J. H. BOOTHE., A. GREEN., J. P. PETISI., 1953; RITTER LAWRENCE., 1957). As indústrias farmacêuticas adicionam ácido ascórbico para conferir estabilidade biológica e torna-la apta a ser administrada ao organismo. Este trabalho desenvolve um método para identificação de Tetraciclina (TC) e epímero da tetraciclina (epi-TC) em medicamentos veterinários a base de ácido ascórbico e isômeros ácido L-ascórbico (LAA) e ácido D-iso-ascórbico (DIAA) utilizando cromatografia líquida de rápida eficiência com arranjo de fotodiodos (UFLC-DAD).

Material e métodos

1. Reagentes e Soluções Todos os reagentes utilizados foram grau HPLC acetonitrila fabricado por Merck (). Soluções injetáveis de medicamentos antimicrobianos foram filtradas em nylon (13 mm x 0,45 μm). Os procedimentos de preparo estão descritos em Farmacopeia Americana. A concentração da solução trabalho TC é 50 µgmL e AA de 30 µgmL. As faixas de concentrações das soluções são descritas Sequência 1 e 2, respectivamente. AA (0,3 e 0,15 µgmL) e TC (0,5 e 0,25 µgmL). As soluções têm sido preparadas por adição de padrão externo solução e diluído em água (resistividade > 16 MΩ). 1.2 Condições do Sistema Cromatográfico As análises foram realizadas em sistema cromatográfico UFLC-DAD modelo LC-20 ® e coluna de fase reversa de C8 (4,6 mm x 25 cm, 5 μm) e de injeção por loop. Os Parâmetros cromatográficos foram testados para composição da fase móvel e água e acetonitrila (50:50), (70:30), (80:20) e (90:10) e fluxo (0,1 – 1 mLmin-1), respectivamente. O gradiente binário constitui-se de água e acetonitrila 80:20 (v/v). A melhor condição para fluxo é de 1 mLmin a temperatura constante de 25 °C. O detector utilizado foi com arranjo de fotodiodos, o comprimento de onda foi selecionado de acordo com o máximo de absorbância para cada família de beta-lactâmicos de 220, 370 e 450 nm.

Resultado e discussão

O planejamento das condições cromatográficas foi realizado para aumentar a resolução dos picos investigados e evitar interferentes e sobreposição. Os melhores resultados foram obtidos utilizando a fase móvel de água: acetonitrila 80:20 (v/v) e fluxo de 1 mLmin. Os comprimentos de onda de detecção de foram estudados no intervalo entre 190 e 800 nm. A intensidade máxima TC foi trabalhado em 220, 370 e 450 nm. Andersen et al., 2005 enfatizam que tetraciclinas são susceptíveis a formar quatro epímeros em função do pH e da temperatura. Fox, Smith, Bitler, Reichenthal, & Origoni, 1954 mostram que TCs podem sofrer uma epimerização reversível em quatro de carbono para formar uma nova série de compostos, as 4-epi-tetraciclinas. Desta forma, o cromatograma da Figura 1 mostra picos menos intensos de epi – TC em 1,5 min. A seletividade foi confirmada pela ausência de interferentes de picos sobrepostos. O procedimento utilizando coluna em fase reversa C8 e eluição por gradiente é satisfatório oferece um bom desempenho. A Resolução adequada entre todos os picos TC é alcançado dentro do tempo de análise relativamente curto entre (1,55 – 1,7 min), para os agentes antioxidantes LAA e DIIA o tempo de retenção de 1,38 e 1,45 min, respectivamente. Considerando, a resolução de (0,80 – 0,96) e seletividade de (2 – 2,44), os procedimentos em limite de confiança de 95 % têm sido adequados para identificação de TC, epi – TC em presença de LAA e DIAA.

A Tabela 1 mostra um estudo das principais condições para identificação dos compostos analisados.


A Figura 1 mostra a separação em tempos de retenção curtos para LAA (1,38 min) DIIA (1,45 min), epi – TC (1,55 min) e TC (1,6 min).

Conclusões

A qualidade dos medicamentos veterinários usados em animais produtores de alimentos reflete na valorização da matéria-prima, toxidade e principalmente na segurança dos alimentos. O método desenvolvido tem demostrado ser apto para identificação de Tetraciclina e epímeros, presentes em soluções injetáveis a base de ácido ascórbico. Os resultados mostraram que o método alia a especificidade, com sensibilidade, reprodutibilidade, custo-efetividade e rápida obtenção do sinal analítico da substância em estudo, após planejamento das condições cromatográficas.

Agradecimentos

Os autores agradecem CAPES,PPGQ, IQ e UFRN, pelo suporte.

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