Análise da composição química e avaliação da atividade antiacetilcolinesterase do óleo essencial das folhas de Lippia microphylla Cham.

ISBN 978-85-85905-23-1

Área

Produtos Naturais

Autores

Morais, S.M. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Silva, A.A. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Rodrigues, A.L.M. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Alves, D.R. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Felix, S.F. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ) ; Maciel, G.L. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO CEARÁ)

Resumo

A Lippia microphylla, conhecida popularmente como Alecrim de tabuleiro, apresenta diversas atividades biológicas relatadas na literatura. Desta forma o presente trabalho teve como objetivo realizar uma análise química do óleo essencial das folhas, e avaliar o potencial de inibição da enzima Acetilcolinesterase (AChE). Na análise da composição química foram identificados como constituintes majoritários: o timol; 1,8-cineol; éter metil-timol, cimeno, γ-terpineno e cariofileno. Na atividade anti-AChE, o óleo essencial teve um bom resultado frente à inibição da enzima AChE quando comparada com o padrão fisostigmina. Portanto o óleo essencial de L. microphylla tem propriedades que a caracteriza com potencial ação contra a Doença de Alzheimer, ampliando assim o valor medicinal desta planta.

Palavras chaves

Lippia; óleo essencial; atividade anti-AChE

Introdução

O gênero Lippia é rico em espécies aromáticas, caracterizadas pela produção de óleos essenciais, que possuem função na planta tanto para atrair polinizadores quanto para repelir inimigos naturais. Os óleos essenciais são constituídos por compostos voláteis, principalmente de mono e sesquiterpenos e de fenilpropanoides, metabólitos que conferem suas características organolépticas (CASTRO et al., 2005). Mesmo os óleos essenciais de Lippia spp. representando fontes naturais para o desenvolvimento de novos produtos, capazes de controlar o desenvolvimento de fitopatógenos, muitas espécies vegetais ainda não foram estudadas com o fim antiacetilcolinesterásico. O estudo da atividade antiacetilcolinesterase é de grande importância, principalmente, na prevenção do mal de Alzheimer, que é uma patologia neurodegenerativa caracterizada pela perda das capacidades cognitivas superiores, ocasionando em perda de memória. Uma das alternativas para tratar esta doença é aumentar o nível do neurotransmissor acetilcolina no cérebro, usando inibidores da enzima acetilcolinesterase (AchE) ( FILHO et al., 2006). Registros etnofarmacológicos relatam o uso de folhas de Lippia microphylla para tratar distúrbios gastrointestinais, influenza, bronquite, tosse, congestão nasal e sinusite durante a vaporização, cujos óleos voláteis aromáticos são ricos em monoterpenos, especialmente cineol, terpineol e timol. Os óleos essenciais também apresentam atividade larvicida em larvas de Aedes aegypti e ação antifúngica, antibacteriana, citotóxica e antitumoral em células humanas e murinas (Simões et al., 2015). Assim, este trabalho teve como objetivo caracterizar quimicamente o óleo essencial das folhas de Lippia microphylla, e realizar uma avaliação de sua atividade antiacetilcolinesterásica.

Material e métodos

A planta foi coletada dia 03 de março de 2018 às 8:30 na Serra do Gadelha, cidade de Iguatu, situada no interior do Estado do Ceará. O óleo essencial das folhas de L. microphylla foi extraído pelo método de hidrodestilação utilizando o aparelho de Clevenger. Empregou-se 600 gramas de folhas e o procedimento teve duração de 3h, contados após o inicio da condensação do vapor no Clevenger, seguindo a metodologia proposta por Teles et al.(2012). A análise da composição química do óleo essencial foi feita através da técnica de cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas (CG/EM), utilizando o Cromatógrafo Shimadzu QP2010 nas seguintes condições: coluna Rtx-5MS (5%, difenil / 95% dimetilpolisiloxano) com 30m x 0,25mm x 0,25µmdf; gás transportador: He (24,2mL / min, em modo de velocidade linear constante); a temperatura ambiente inicial foi de 250ºC, em modo split (1:100), e a temperatura do detector foi de 250ºC. A temperatura da coluna foi programada de 35 a 180ºC a 4ºC / min e de 180 a 280ºC a 17ºC / min e a 280ºC por 10 minutos. Espectros de massa: impacto de elétrons 70 eV. A amostra foi injetada em volume de 1µL.Os compostos foram identificados pelos tempos de retenção relativos à GC para compostos conhecidos e pela comparação de sua amostra com aqueles presentes no banco de dados de computador (NIST) e na literatura publicada (Adams,2001;2007). A atividade antiacetilcolinesterase foi aferida em placas de 96 poços de fundo chato utilizando leitor Elisa BIOTEK, modelo ELX 800, software “Gen5 V2.04.11”, baseando-se na metodologia descrita por ELLMAN et al.(1961). A porcentagem de inibição da AChE foi calculada através da comparação das velocidades de reação (hidrólise do substrato) das amostras em relação ao branco(considerada atividade total da AChE,100%).

Resultado e discussão

A composição química do óleo essencial das folhas de Lippia microphylla foi obtida após análise por CG-EM (tabela 1), empregando o índice de Kovats (IK) e a comparação dos espectros de massas de cada constituinte com dados da literatura (ADAMS, 2006). O cromatograma obtido dos constituintes do óleo essencial é mostrado na figura 1. O rendimento do óleo essencial, com base na massa de matéria seca, foi de 1,70%. A partir da análise química, pode-se observar que os componentes encontrados em maior proporção foram: timol (58,46%), eucaliptol (9,43%), éter-metil-timol (7,02%), cimeno (6,02%), cariofileno (2,57%), γ-terpineno (2,82%). Relacionando os resultados encontrados com a literatura, algumas espécies mostram composição de óleo variável. Estas diferenças podem ser ocasionadas por diversos fatores como: época da coleta, disponibilidade hídrica, temperatura, radiação ultravioleta, nutrientes, a indução por patógenos, a poluição e sazonalidade (GOBBO-NETO e LOPES, 2007). Na avaliação da atividade antiacetilcolinesterásica foram encontrados os seguintes valores de IC50 mostrados na tabela 2. Muitos terpenos tiveram sua atividade inibidora de Acetilcolinesterase comprovada, tais como o timol, eucaliptol, α-pineno (Jukic et al., 2007; Miyazama et al., 1998; Perry et al., 2000), substâncias que também estão presentes no óleo essencial estudado. Porém, quando estas substâncias são testadas em conjunto, a atividade inibidora da enzima pode ser reduzida ou intensificada devido ao efeito sinérgico e a inibição competitiva entre elas, como o observado neste trabalho.

Tabela 1:Composição percentual dos constituintes químicos do óleo essencial das folhas da L. microphylla. Figura 1: Cromatograma do óleo essencial.


Tabela 2: Avaliação da atividade antiacetilcolinesterásica do óleo essencial das folhas de Lippia microphylla.

Conclusões

Os resultados obtidos demonstraram uma capacidade promissora do óleo essencial das folhas de Lippia microphylla, uma vez que foram capazes de inibir a enzima acetilcolinesterase. Deste modo, futuros trabalhos serão realizados com o interesse no isolamento e identificação dos princípios ativos, da Lippia microphylla, responsáveis pela atividade antiacetilcolinesterase, para o desenvolvimento de novos fitofármacos.

Agradecimentos

À Dra. Selene Maia de Morais, pela orientação da bolsa de IC; Ao Laboratório de química de produtos naturais, pelo suporte técnico; À FUNCAP, pelo apoio financeiro; À

Referências

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