[Fe(AT)2](Cl)2, onde AT= Ácido Tânico: Atividade Antioxidante e Avaliação da Segurança Não Clínica.

ISBN 978-85-85905-25-5

Área

Iniciação Científica

Autores

Mendonca de Oliveira, L. (UECE) ; Araujo Gomes Ferreira, T. (UECE) ; Eire Silva Alencar de Menezes, J. (UECE) ; Ernani Alves Magalhães, F. (UECE) ; Crislândia Oliveira Silva, F. (UECE) ; Ribeiro Alves, D. (UECE) ; Maia de Morais, S. (UECE) ; de Oliveira Pinheiro, S. (UECE)

Resumo

O Ácido Tânico (C76H52O46), um polifenol que apresenta atividades anticarcinogênica e antioxidante. O objetivo foi avaliar a segurança não clínica do [Fe(AT)2]Cl2 frente a zebrafish (Danio rerio) (ZFa) adulto. Os testes realizados frente ao ZFa foram de campo aberto, para avaliar a atividade locomotora e de toxicidade aguda por 96h. Com o [Fe(AT)2]Cl2 obtido através da síntese, realizou-se caracterizações por espectroscopia na região do UV-Vis e na região do Infravermelho. Foram feitos os testes da atividade antioxidante (DPPH) do AT e do [Fe(AT)2]Cl2, para depois ser feita a avaliação não clínica. Quanto à atividade locomotora, o composto [Fe(AT)2] (Cl)2 apresentou efeito ansiolítico e provou-se que as doses do complexo (4,0, 12 e 40 mg/kg) não são tóxicas frente ao ZFa.

Palavras chaves

ZEBRAFISH; COMPLEXOS INORGÂNICOS; ÁCIDO TÂNICO

Introdução

O ferro, amplamente usado na indústria e conhecido desde a antiguidade, é um nutriente essencial para todos os organismos vivos (ESPÓSITO, 2011). O Ácido tânico (C76H52O46), é uma designação atribuída a várias substâncias amareladas muito difundidas no reino vegetal, que são ligeiramente solúveis em água e com sais férricos provocam colorações negras e verdes. Os taninos são substâncias fenólicas que apresentam diversas atividades farmacológicas, como: antimutagênicas, anticarcinogênicas, antioxidante e bactericida. O AT, que pertence à classe dos galotaninos, é indicado para infecções causadas por herpes labial ou para uso ginecológico devido à sua ação adstringente (BRANDÃO, 2008). Os antioxidantes podem ser definidos como compostos que inibem a oxidação de outras moléculas impedindo a iniciação ou propagação de reações em cadeia oxidantes (VELIOGLU et al., 1998). Antioxidantes também podem proteger o corpo humano dos efeitos de radicais livres. Eles retardam o progresso de doenças crônicas, assim como a peroxidação lipídica (PRYOR, 1991; KINSELLA et al., 1993; LAI et al., 2001; GU¨ LC¸In et al., 2004). A atividade locomotora é um dos parâmetros de análise comportamental que vem sendo utilizado para avaliar ação de drogas que podem atuar sob o sistema nervoso central do zebrafish (Danio rerio) adulto e causar comprometimento locomotor ou não (KURTA e PALESTIS, 2010; GEBAUER et al., 2011; TAYLOR et al., 2017). O zebrafish adulto vem sendo empregado como modelo animal complementar ao uso de roedores em testes genéticos, biologia do desenvolvimento, neurobiológicos e toxicológicos (RESENDE e SOCCOL, 2015), pois apresenta baixo custo, adaptabilidade diversa, ciclo de reprodução curto, alta fecundidade e embriões transparentes (DAI et al., 2014).

Material e métodos

Atividade Antioxidante do AT e do [Fe(AT)2](Cl)2: Na avaliação foi utilizado o método de varredura do radical livre DPPH, descrito por RUFINO et al., 2007. Em um tubo de ensaio, colocaram-se 3,9 mL da solução de DPPH. Colocou- se ao tubo 0,1 mL da amostra diluída em determinadas concentrações com DMSO a serem testadas. Após 60 minutos, mediu-se a absorbância em um espectrofotômetro no comprimento de onda de 515 nm. Avaliação da Segurança Não Clínica do [Fe(AT)2]Cl2 frente a Zebrafish (Danio rerio) Adulto Atividade locomotora: Foi realizado o teste de campo aberto para avaliar alteração ou não da coordenação motora dos animais, seja por sedação e/ou relaxamento muscular (MAGALHÃES et al., 2017). Inicialmente, os animais foram tratados (v.o.) com amostra teste (4,0 ou 12 ou 40 mg/kg), veículo (DMSO 3%; 20 µL) ou Diazepam (DZP, controle sedativo; 2,5 mg/kg.). Um grupo de animais sem tratamentos foi incluído (Naive). Após 1 h, os animais foram adicionados em placas de Petri de vidro, com a mesma água do aquário, marcadas com quatro quadrantes e analisada a atividade locomotora através da contagem do número de cruzamento de linhas (CL).Toxicidade Aguda 96 h: O estudo da toxicidade aguda foi realizado frente ao zebrafish (D. rerio) adulto conforme metodologias propostas pela OECD (1992) e Huang et al. (2014). Os animais foram tratados com 20 µL, via oral, com amostra teste (4,0 ou 12 ou 40 mg/kg) ou veículo (Controle, DMSO 3%; 20 µL) e deixados em repouso para analisar a taxa de mortalidade. Após 96 horas, foi anotado o número de peixes mortos em cada grupo e determinado a Dose Letal (DL) capaz de matar 50% dos animais (DL50) (ARELLANO-AGUILAR et al., 2015). Comitê de Ética para o uso de animais da Universidade do Estado do Ceará, número do protocolo: 3344801/2017

Resultado e discussão

De acordo com o valor do IC50 o [Fe(AT)2](Cl)2 mostrou ser um bom antioxidante com IC50 (3,414 ± 0,4123) próximo ao IC50 do AT (3,066 ± 0,3353). A Diminuição da absorbância indica a capacidade de eliminação de radicais. Na atividade locomotora (AL) as doses testadas do [Fe(AT)2](Cl2) (4,0 ou 12 ou 40 mg/kg; v.o.) diminuíram à locomoção dos animais, pois apresentaram significantemente (p>0,001; p>0,01; p>0,001) diferente do grupo naive (AL = 100%) e significantemente (p>0,001; p>0,05; p>0,001) diferente do veículo (AL =96,45%), respectivamente (Figura 1). Tal diminuição da atividade locomotora causada por [Fe(AT)2]Cl2 sugere uma possível ação sedativa, tais como os benzodiazepínicos (drogas sedativas/ansiolíticas), os quais diminuem a mobilidade de zebrafish adulto em campo aberto, conforme destacam Gupta et al., (2014) e Benneh et al., (2017).O zebrafish adulto vem sendo empregado em testes de toxicidade no monitoramento de contaminantes ambientais. Como Huang et al., (2014) utilizaram o zebrafish adulto para avaliar a ação de um agroquímico (Deltametrin), empregando-se o comportamento locomotor e mortalidade (CL50) em 24h como parâmetros de toxicidade aguda. Vale salientar que o zebrafish adulto, também é utilizado para avaliar a toxicidade de compostos farmacêuticos (HILL, 2005), bem como biomonitoramento toxicológico no desenvolvimento de medicamentos (CABALLERO e CANDIRACI, 2018). Nesse contexto, empregou-se o zebrafish adulto como modelo preditivo para avaliar a toxicidade aguda do complexo [Fe(AT)2]Cl2. Como resultado, constatou-se que nenhuma dose testada de [Fe(AT)2]Cl2 (4,0 ou 12 ou 40 mg/kg) se mostraram tóxicas frente ao ZFa em até 96 h de análise, conforme ilustrado na Tabela 1.

Efeito de [Fe(AT)2]Cl2 sob a atividade locomotora do zebrafish (Danio rerio) adulto no Teste de Campo Aberto.

Conclusões

Com os resultados dos estudos espectroscópico do [Fe(AT)2](Cl)2 conclui-se que ocorreu a coordenação do ligante ao íon metálico. Os estudos do infravermelho sugerem a coordenação do AT pelo átomo de oxigênio de um éster. Conclui-se que a eliminação de radicais DPPH do AT e do [Fe(AT)2](Cl)2, mostram que tanto o AT como o complexo podem eliminar com eficácia o DPPH. Os dados obtidos revelaram que todas as doses de [Fe(AT)2]Cl2 apresentaram segurança clínica, pois não foram tóxicas frente ao ZFa em 96h. As doses de [Fe(AT)2]Cl2, contêm possível efeito sedativo, diminuindo a locomoção do ZFa.

Agradecimentos

Ao Laboratório de Química Inorgânica(LQuin), a Universidade Estadual do Ceará (UECE) e ao Laboratório de Química de Produtos Naturais(Lqpn).

Referências

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