TÍTULO: Incorporação de xiloglucana de Tamarindus indica em meio de cultura no cultivo de E. coli
AUTORES: ALVES, R. C. (UECE/FAFIDAM) ; OLIVEIRA, E. S. E. (UECE/FAFIDAM) ; TEIXEIRA-SÁ, D.M.A. (UECE/FAFIDAM) ; SILVA, L. M. A. (UECE) ; ALMEIDA, F. F. (UECE) ; GUIMARÃES, F. R. (CENTEC)
RESUMO: As técnicas de cultivo bacteriano vêm sendo largamente exploradas e estudadas por pesquisadores do mundo inteiro. Este trabalho tem como objetivo estudar o emprego de blendas ágar/xiloglucanas da espécie Tamarindus indica, como substituintes parciais do ágar e a utilização dos mesmos na exploração de cultivo microbiológico de E.coli. Após obtenção da xiloglucana por extração dos cotilédones das sementes com água seguido de precipitação com álcool, foram preparadas soluções em diferentes concentrações e adicionada ao caldo nutritivo Lactose Broth contendo ágar (Figura 1). Os meios T1 e T2 apresentaram solidificação, transparência e homogeneidade adequadas para o cultivo de bactérias. Foi realizada a contagem do número de colônias após 24 horas de inoculação indicando bons resultados.
PALAVRAS CHAVES: xiloglucana, meios de cultura, e. coli
INTRODUÇÃO: Os meios de cultura consistem na incorporação e associação qualitativa e quantitativa de substâncias que fornecem os nutrientes necessários ao desenvolvimento e cultivo do microrganismo fora do seu meio natural. Tendo em vista a ampla diversidade metabólica dos microrganismos, existem vários tipos de meios de cultura que satisfazem as variadas exigências nutricionais e condições ambientais favoráveis. A maioria dos meios de cultura sejam sólidos ou semi-sólidos são gelificados com ágar, um carboidrato estrutural da parede celular de diversos gêneros e espécies de algas marinhas vermelhas da classe Rodophyta, que apresenta atividade gelificante característica em faixa de temperatura específica e que têm se caracterizado como agente gelificante preferencial nos meios de cultura em geral. É pela forma de obtenção, disponibilidade e elevado custo, que se traçam métodos que possam substituir o ágar na exploração da ciência em geral. Tamarindus é um gênero botânico pertencente à família fabaceae. A espécie Tamarindus indica é originária das savanas africanas embora o cultivo e a exportação sejam explorados principalmente pela Índia. Os cotilédones das sementes desta espécie apresentam 40 % de xiloglucanas. Este polissacarídeo apresenta uma cadeira principal de unidades beta−(1-4)−D-glucana com cadeias laterais completas de alfa−(1-6)−D-xilose. Em alguns casos as unidades das cadeias laterais são substituídas por beta−(1-2)−D-galactose ou por alfa- (1-2)−L-fucose. Xiloglucanas em soluções aquosas podem formar gel sob certas condições, tais como a adição de álcool. (Fry, 19989, Teixeira, 2005). Este trabalho têm como objetivo estudar o emprego de xiloglucana de Tamarindus indica na substituição parcial do ágar utilizando como modelo de culturas microbiológica a E.coli.
MATERIAL E MÉTODOS: 1.1 Extração da xiloglucana de Tamarindus indica
Os polissacarídeos (xiloglucanas) de sementes de Tamarindus indica foram extraídos conforme esquematizado no fluxograma da figura 1.
1.2 Preparação dos meios contendo xiloglucana
Para o preparo do meio modificado, as soluções polissacarídicas de xiloglucana de Tamarindus indica foram preparadas em diferente concentrações conforme escrito na tabela 1 da Figura 1. No dia posterior à solubilização do polissacarídeo foram adicionados o ágar e caldo nutritivo Lactose Broth sob agitação magnética. Posteriormente os meios foram esterilizados. Para cada tratamento descrito na tabela 1 da Figura 1 foram preparados 120 mL de meio modificado em triplicata e com diferentes proporções com o objetivo de analisar a concentração ideal na substituição parcial do ágar e para o cultivo microbiológico de algumas culturas puras de bactérias.
1.3 Preparação do meio de cultura /Plate Count Agar- PCA
Com objetivo de reavivar as culturas bacterianas, e para meio controle foram preparadas 120mL de meio Plate Count Agar- PCA para cada cultura pura de bactérias. Para atingir a homogeneidade desses meios, as soluções foram solubilizadas sob temperatura e agitação magnética, e posteriormente esterilizadas em autoclave sob 121°C por 15min.
1.4 Inoculação Bacteriana Por Estriamento Em Placas
As Placas de Petri contendo meio Plate Count Agar- PCA e os meio modificados esterilizados foram identificadas e subdivididas em camadas, foram feitas as inoculações em forma de estrias e pontos sobre o meio contido nas placas. Visando o crescimento e cultivo bacteriano as placas foram incubadas invertidas a 32,5°C em câmara de crescimento por 24 h.
1.5 Contagem das colônias
As colônias foram contadas em um contador manual CP-60 da Phoenix.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os meios modificados sólidos e semi-sólidos após ficarem 3 dias em repouso no freezer e serem descongelados apresentaram alguns sinais observáveis a olho nu de precipitação no fundo do recipiente. A ordem crescente de precipitação nos tratamentos foram T1 < T3 < T2 < T4 .
As características de solidificação, homogeneidade e transparências dos meios modificados foram classificações em alta, média, baixa ou muito baixa. Na figura 2 observamos estes resultados e constatamos que os meios T1 e T2 foram os que ficaram mais parecidos com o controle.
Em resposta aos procedimentos experimentais trabalhados no cultivo de E.coli em meio modificado, observou-se um crescimento significativo pela técnica de semeadura das células bacterianas para as tratamentos T1, T2, T3. Na figura 2 está apresentado uma foto para Cultivo de E. coli em meio Controle 1 e Meio T2 bem como os resultados de contagem das colônias. O tratamento T4 (Meio modificado contendo xiloglucana 0,75% + ágar 0,25% + meio Lactosado) observou-se pouco homogêneo quebradiço (semi-solidificado) e apresentou-se pouco favorável para o cultivo de E.coli, dificultando a identificação da proliferação celular bacteriana.
CONCLUSÕES: Os tratamentos de cultivo bacteriano em meio modificado com xiloglucana de Hymenaea courbaril mostrarem-se eficientes para o cultivo microbiológico de E.coli. Sendo observáveis em escala padrão de cultivo, uma semelhança dos meios de cultura comumente trabalhados.
AGRADECIMENTOS: Instituto CENTEC.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: FRY, S.C. The structure and functions of xyloglucan. J. Exp. Bot., v. 40, n. 211, p. 1-11,1989.
TEIXEIRA, D.M.A. Isolamento e caracterização de um par lectina-receptor
endógeno de semente de Mucuna sloanei (Fawcett & Rendle). Fortaleza, 2005. Tese
(Doutorado em Ciências – Bioquímica) – Centro de Ciências, Departamento de
Bioquímica e Biologia Molecular, Universidade Federal do Ceará.
