Realizado em Vitória/ES, de 17 a 19 de Setembro de 2014.
ISBN: 978-85-85905-08-8
TÍTULO: Isolamento de microrganismos com potencial uso para a produção de lipases a partir de resíduos gordurosos doméstico.
AUTORES: Guesser, J.V.C. (INSTITUTO FEDERAL DE SANTA CATARINA -FLORIANÓPOLIS) ; Serpa, G. (INSTITUTO FEDERAL DE SANTA CATARINA -FLORIANÓPOLIS)
RESUMO: O presente trabalho teve por objetivo o isolamento e a caracterização de
microrganismos produtores de lipases, obtidos a partir de amostras de caixa de
gordura e de solo exposto a resíduo oleoso vegetal de uso doméstico, a fim de
selecionar as melhores cepas para serem utilizadas, obtendo-se uma seleta coleção
de microrganismos (bactérias, leveduras e fungos) com potencial uso
biotecnológico. Os diferentes organismos foram selecionados como produtores de
lipase a partir do teste com Rodamina B, que é um indicador da liberação de ácidos
graxos por ação de lipases microbianas. Os estudos realizados resultaram no
isolamento de 3 cepas de bactérias, 9 cepas de leveduras e 8 cepas de fungos.
PALAVRAS CHAVES: resíduo gorduroso ; micro-organismos ; lipases
INTRODUÇÃO: A alta demanda de óleos e gorduras, que são componentes lipídicos da alimentação
humana, estão resultando no aumento de efluentes ricos em substâncias oleosas
(PEIL et al, p. 1, 2012). Esses efluentes podem causar a formação de
filmes oleosos na superfície da água que impedem a difusão de oxigênio com o
meio, acarretando assim a mortandade da vida aquática, além de entupir redes e
dutos de tratamento de esgoto provocando vazamentos e mau cheiro (MENDES et
al, p. 298, 2005). O tratamento desses efluentes pode ser realizado
utilizando lipases, que são enzimas que catalisam a hidrólise das ligações
ésters-carboxilicas de óleos e gorduras em ácidos graxos, acilgliceróis e
gliceróis .(SEMIONATO et al, p. 35, 2006; FALCONE et al, p. 27,
2009). A capacidade dessas enzimas hidrolisarem óleos e gorduras gera um grande
interesse em sua utilização em tratamentos de efluentes gordurosos. Sendo os
microrganismos as principais fontes de lipases comercializadas e utilizadas
em processos industriais, existe um grande interesse no seu isolamento (PEIL
et al, p. 1, 2012). Lipases também são importantes catalisadores na
química orgânica, devido a sua alta regiosseletividade e/ou
enantiosseletividade, ampliando, desta forma, sua aplicação industrial (FALCONE
et al, p. 27, 2009). Dentro deste contexto, o presente trabalho buscou
isolar cepas de microrganismos (bactérias, leveduras e fungos) produtores de
lipases extracelular de alta atividade lipolítica, obtendo uma coleção com
potencial uso biotecnológico.
MATERIAL E MÉTODOS: Amostras de caixa de gordura e de solo submetido a resíduos de óleo vegetal
doméstico foram homogeneizados e inoculados em três diferentes meios líquidos:
meio mínimo contendo fungicida para o enriquecimento de bactérias, meio YEPG
para leveduras e ABD para fungos contendo bactericida. Os meios foram acrescidos
de óleo de soja (5% v/v) emulsificados com Triton X-100 (20% v/v) como fonte de
carbono e permaneceram durante 120 horas a temperatura de 30°C sob rotação de
120 rpm. Após a fase de enriquecimento, 1 mL de amostra foi diluida em água
deionizada estéril nas seguintes proporções : 10-2, 10-4
e 10-6. De cada diluição retirou-se uma alíquota de 1 mL que foi
espalhada em placas de Petri com o meio sólido respectivo para cada tipo de
microrganismo contendo óleo de soja emulsificado, permaneceram por um período
de 96 horas à 30°C em uma estufa incubadora. As placas com a diluição que
permitiu melhor visualização das colônias foram utilizadas para cada tipo de
organismo. Cada colônia foi repicada pela técnica de esgotamento por estria até
obter o isolamento de cada cepa. As cepas isoladas foram incubadas em meio
sólido contendo óleo de soja emulsificado com Triton X-100 e uma solução ( 1%
m/v ) de Rodamina B com concentração final de 1% v/v, por 72 horas à 30°C. Após
o período de incubação, as cepas foram submetidas à luz UV para identificar os
organismos produtores de lipase. A Rodamina B forma um complexo fluorescente com
ácidos graxos detectável nesta faixa de luz. As cepas que apresentaram
resultado positivo para o teste, foram isoladas em Agar inclinado contendo óleo
de soja emulsificado e Rodamina B e armazenadas a 4°C.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Neste trabalho foram isoladas 19 cepas de bactérias, 10 cepas de leveduras e 15
cepas de fungos a partir das amostras homogeneizadas de escuma de caixa de gordura
e de solo exposto a resíduos de óleo vegetal usado. Após o isolamento as cepas
foram submetidas ao teste com Rodamina B e classificadas como lipolíticas aquelas
que apresentaram um halo fluorescente quando expostas a luz UV, como mostrado na
Figura 1. Das cepas isoladas, três de bactérias, nove de leveduras e oito de
fungos apresentaram resultado positivo para o teste com Rodamina B. As demais
foram descartadas.
Figura 1
Halo fluorescente apresentado por uma cepa
bacteriana.
CONCLUSÕES: A partir da amostra da escuma de caixa de gordura e de solo submetido
periodicamente a despejo de óleo de cozinha já utilizado, foram isoladas 3 cepas
de bactérias, 9 de leveduras e 8 de fungos produtores de lipases extracelular, que
apresentaram halo fluorescente no crescimento no meio contendo Rodamina B. Esses
microrganismos selecionados apresentam grande potencial como produtores de lipases
para aplicações industriais ou de biorremediação.
AGRADECIMENTOS: Os autores agradecem ao CNPq apelo apoio fornecido para a realização do trabalho.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: FALCONE, C. O. Avaliação de lipase bacteriana visando sua utilização na geração de biodiesel a partir de resíduos oleosos do saneamento. [s.l] Universidade Federal do Espírito Santo, 2009.
MENDES, A. A.; PEREIRA, E. B.; CASTRO, H. F. DE. Aplicação de lipases no tratamento de águas residuárias com elevados teores de lipídeos. Química Nova, v. 28, p. 296-305, 2005.
PEIL, G. S.; KUSS, A. V. Microrganismos produtores de lipases para biorremediação. Universidade Federal de Pelotas, 2012.
SEMIONATO, S. Avaliação da atividade lipolítica de bactérias isoladas dos dispositivos de remoção de gordura da ETE-UFES. Dissertação de Mestrado; Curso de Pós-graduação em Engenharia Ambiental; Universidade Federal do Espírito Santo, 2006.