ÁREA: IC-Iniciação Científica
TÍTULO: PREPARAÇÃO DE MATERIAIS PARA BIOSSENSORES DE POLUIÇÃO USANDO FOSFATO DE CÁLCIO E ACETATO DE CELULOSE
AUTORES: CESÁRIO,M.R1 (IC) ; JACOME,M.S.G1(IC) .; MACEDO,V.S1(IC) .; LIMA,C.B.A2 (PG)
1.ALUNOS DO CURSO DE LICENCIATURA EM QUíMICA - UERN ( ROMOLOSQUIMICA@HOTMAIL.COM)
2. PESQUISADOR DO DEPARTAMENTO DE QUíMICA - UERN (BOSCOALI@YAHOO.COM.BR)
RESUMO: O trabalho consiste na obtenção e na purificação da enzima polifenoloxidase obtida a partir do extrato bruto de inhame (Alocasia macrorhiza) e na reação desta enzima com fosfato de cálcio esfoliado com o hidróxido de tetrabutilamônio. O acetato de celulose( obtido a partir de filtros de cigarro usados) também foi usado para a incorporação da enzima.Os valores da atividade específica, medidos pela espectofotometria UV-Vísivel, estão de acordo com os encontrados na literatura e são próximos a 860 U/mg. Os efeitos do pH de soluções tampões (pH entre 6 até 8) foram avaliados e o pH igual a 7 se mostrou ideal para o trabalho. A purificação foi feita usando-se o método do biureto.
PALAVRAS CHAVES: polifenoloxidase, fosfato de cálcio e acetato de celulose
INTRODUÇÃO: Atualmente existe um consenso universal a respeito da necessidade de monitorar continuamente o teor de poluentes químicos nos cursos de águas naturais e nos inúmeros efluentes industriais descarregados nestes recursos hídricos. Muitos destes compostos possuem estrutura fenólica e produzem efeitos tóxicos em animais e plantas, pois facilmente penetram na pele e membranas celulares, determinando um amplo espectro de genotoxicidade, mutagenicidade e hepatotoxicidade. As análises tanto do fenol como de espécies fenólicas estão sendo feitas por métodos analíticos versáteis e baratos e incluem os biossensores, dispositivos que contêm tecidos vegetais retirados de frutas, vegetais, cereais e leguminosas (1,2) . O objetivo deste trabalho é fornecer informações adicionais sobre a análise da polifenoloxidase extraída do inhame.
MATERIAL E MÉTODOS: Pedaços de inhame descascados e picados foram homogeneizados em liquidificador com 200 mL de tampões 0,1 M, pH entre 6 e 8, contendo 10 g de ácido ascórbico. O material foi filtrado e centrifugado à 6000 r.p.m,durante 60min. As soluções sobrenadantes foram armazenadas em refrigerador e depois incorporadas no fosfato de cálcio(3) ou no acetato de celulose. A atividade da enzima presente no inhame foi determinada pela medida de absorvância em 450 nm. As soluções de pirogalol (Sigma) foram preparadas em tampão fosfato 0,1 M, pH entre 6 a 8. O método do biureto foi usado para determinar a quantidade de enzima. Reagentes de grau analítico foram usados, para preparar os tampões. O fosfato de cálcio foi sintetizado no laboratório e caracterizado por análise térmica e o acetato de celulose foi obtido a partir do reaproveitamento de filtros de cigarros. O espectrofotômetro utilizado foi da Micronal modelo B 342 H. A centrífuga utilizada foi a Du Pont Instruments Sorvael, modelo RC-3B.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: A atividade enzimática calculada da curva de absorvância versus o tempo de reação foi igual a 860,00 U/mg. Este valor está de acordo com outros encontrados na literatura e que o inhame utilizado contém muita enzima.
O fosfato de cálcio apresenta duas perdas de massa entre 373 a 573 K referente a presença de duas moléculas de água e outro em 1073 K relativo à perda de pirofosfato e uma perda de massa entre 573 a 673 K quando intercalado com o hidróxido de tetrabutilamônio.
A intercalação é feita para se separar as camadas do fosfato de cálcio e torná-lo apto a receber a enzima. O estudo da dependência do pH com a atividade da enzima foi realizado entre pH 6 e 8. Observamos apenas um máximo em pH 7.
CONCLUSÕES: Os resultados deste trabalho mostram que a enzima polifenoloxidase extraída do inhame apresenta uma atividade aproximadamente igual a 860 U/mg em solução tampão 0,1 M,pH 7.
AGRADECIMENTOS:Agradecemos ao Cnpq pela bolsa concedida.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA:1. FATIBELLO-FILHO,O.; CAPELATO,M.D.1992. Biossensor amperométrico para a determinação de fenóis usando um extrato bruto de inhame(Alocasia macrorhiza).Quimica Nova,17: 38-42.
2. ROSATTO,S.S.; FREIRE,R.S.; DURÁN,N.; KUBOTA,L.T.2001. Biossensores amperómetricos para determinação de compostos fenólicos em amostras de interesse ambiental. Química Nova,24: 77-86.
3. LIMA, C.B.A and AIROLDI, C .2004. Topotactic exchange and intercalation of calcium phosphate. Solid State Sci., 6: 1245-1250.