ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: DETERMINAÇÃO DE AZITROMICINA EM COMPRIMIDOS POR ESPECTROFOTOMETRIA
AUTORES: FERREIRA, J. R. N. - UFSM
CARDOSO, S. G. - UFSM
DORIGONIE, E. R. - UFSM
GOEBEL, K. - UFSM
PARAGINSKI, G. L.- UFSM
RESUMO: A azitromicina (AZ) é um antimicrobiano semi-sintético macrolídeo, derivado da eritromicina. Utilizada no tratamento de infecções do trato respiratório, da pele e de tecidos moles. Encontram-se no mercado nacional nas formas de comprimidos, suspensão oral e cápsulas manipuladas. Até o momento não há métodos espectrofotométricos para a análise de AZ. O objetivo deste estudo foi desenvolver e validar método por espectrofotometria no ultravioleta para a determinação de AZ em comprimidos, baseado na reação do ácido sulfúrico (98%) com AZ, em acetonitrila. As análises foram feitas em 226 nm, demonstrando linearidade (r > 0,999), precisão (DPR intra-dia=1,11%, DPR inter-dia=1,67%), exatidão e específicidade. Não houve diferença significativa entre os resultados do método proposto e o oficial.
PALAVRAS CHAVES: azitromicina, espectrofotometria, validação
INTRODUÇÃO: A azitromicina (AZ) é um antimicrobiano macrolídeo, derivado da eritromicina, com amplo espectro de ação, utilizada em infecções do trato respiratório, da pele e tecidos moles (BREIER et al., 2002). É comercializada no Brasil na forma de comprimidos de 500 mg, suspensão oral de 600 e 900 mg/15 ml e cápsulas manipuladas. Não existe, ainda, monografia para AZ em comprimidos. As monografias das Farmacopéias Americana (USP28,2005) e Brasileira (F.Brás.IV,2003) indicam, respectivamente, a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e método microbiológico por difusão em ágar. Outros métodos utilizam CLAE (GANDHI et al.,2000;ZUBATA et al., 2002;MIGUEL e BARBAS,2003;DEBREMAEKER et al.,2003), espectrofluorimetria (KHASHABA, 2002), quimioluminescência (SONG e WANG,2003), cromatografia em camada delgada (KHEDR e SHEHA,2003) e voltametria (NIGOVIC e SIMUNIC,2003; MANDIC et al., 2003;FARGHALY e MOHAMED,2004;KOMORSKY-LOVRIC e NIGOVIC,2004).Ambos necessitam de equipamentos caros ou não usuais em laboratórios, sendo que alguns requerem tempo maior para execução. Portanto, desenvolveu-se e validou-se um método por espectrofotometria no ultravioleta, devido à simplicidade, rapidez e baixo custo
MATERIAL E MÉTODOS: Utilizou-se como substância de referência AZ com pureza de 98,7%, adquirida da DEG, ácido sulfúrico concentrado (98%) e acetonitrila grau PA. Comprimidos contendo 500 mg de AZ foram adquiridos de dois diferentes fabricantes, denominados A e B. Alíquotas da substância de referência e das amostras (na faixa de concentração entre 50 – 90 mcg/ml) foram transferidas para balões volumétricos de 25 ml, onde se adicionou 20 ml de acetonitrila e 400 mcl de ácido sulfúrico concentrado. Os volumes foram completados com acetonitrila e as leituras foram realizadas em espectrofotômetro Shimadzu UV-1601, em 226 nm, utilizando como branco solução preparada similarmente. A validação foi baseada em parâmetros preconizados pela USP (2005) e ICH (1996).
RESULTADOS E DISCUSSÃO: AZ tem baixa absorção na região do ultravioleta, dificultando sua análise. Alguns macrolídeos têm sido identificados por espectrofotometria após reação com ácido sulfúrico, exceto AZ. O volume de ácido sulfúrico, tempo de leitura e temperatura foram avaliados no desenvolvimento do método (Fig.1-2).A adição de 400mcl de ácido sulfúrico foi suficiente para promover a reação, no tempo de 10 a 15 minutos. Nessas condições, a reação entre AZ e ácido produziu solução de coloração amarelada, com máximos de absorção em 226, 394 e 482nm.Devido à melhor sensibilidade e estabilidade, as análises foram realizadas em 226 nm. Segundo Danielson et al(1993), a reação de cor com ácido sulfúrico ocorre devido às moléculas de açúcar na estrutura da eritromicina.Considerando que os açúcares presentes na eritromicina e AZ são similares, propõe-se que a reação entre o ácido sulfúrico e AZ seja a mesma.O método mostrou linearidade satisfatória (45-95mcg/ml), com equação da reta y=0.0076x–0.0258 e r>0,999.A precisão foi demonstrada pelo DPR no mesmo dia e em dias diferentes(Tab1).Para a exatidão comparou-se resultados do método proposto e oficial, sem diferença significativa (p
CONCLUSÕES: O método proposto demonstrou ser de fácil aplicabilidade, de baixo custo e rápido, podendo ser utilizado como alternativa aos métodos microbiológicos e cromatográficos descritos na literatura, para análises de rotina em controle de qualidade de comprimidos contendo azitromicina.
AGRADECIMENTOS:
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA:BREIER, AR.; GARCIA, C.V.; OPPE, T.; STEPPE, M.; SHCAPOVAL, E.E.S. Microbiological assay for azithromycin in pharmaceutical formulations. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v.29, p.957 - 961, 2002.
DANIELSON, N. D.; HOLEMAN, J. A.; BRISTOL, D. C.; D. KIRZNER, H. Simple methods for the qualitative and quantitative determination of macrolide antibiotics. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v.11, p. 121-130, 1993.
DEBREMAEKER, D.; VISKY, D.; CHEPKWONY, H.K.; VAN SCHEPDAEL, A.; ROETS, E.; HOOGMARTENS, J. Analysis of unknown compounds in azitrhomycin bulk samples with liquid chromatography coupled to ion trap mass spectrometry. Rapid Communications in Massa Spectrometry, v. 17, p. 342-350, 2003.
FARGHALY, O.A.E.; MOHAMED, N. A. L. Voltammetric determination of azithromycin at the carbon paste electrode. Talanta, v. 62, p. 531-538, 2004.
FARMACOPÉIA BRASILEIRA, 4. ed., São Paulo, Atheneu, 2003.
GANDHI, R. KAUL, C.L.; PANCHAGNULA, R. Validated LC method for in vitro analysis of azithromycin using electrochemical detection. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v.23, p.1073 - 1079, 2000.
INTERNATIONAL CONFERENCE ON HARMONIZATION of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use, ICH Steering Committee, Validation of Analytical Procedures: Methodology, 1996.
KHASHABA, P. Spectrofluorimetric analysis of certain macrolide antibiotics in bulk and pharmaceutical formulations. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v.27, p.923 - 932, 2002.
KHEDR, A.; SHEHA, M. Quantitative Thin-Layer Chromatographic Method of Analysis of Azithromycin in Pure and Capsule Forms. Journal of Chromatographic Science, v.41, nº 1, p.10-16, 2003.
KOMORSKY-LOVRIC, S.; NIGOVIC, B. Identification of 5-aminosalicylic acid, ciprofloxacin and azithromycin by abrasive stripping voltammetry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 36, p. 81-89, 2004.
MANDIC, Z.; WEITNER, Z.; ILIJAS, M. Electrochemical oxidation of azithromycin and its derivatives. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 33, p. 647-654, 2003.
MIGUEL, L.; BARBAS, C. LC determination of impurities in azithromycin tablets. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v.33, p.211 - 217, 2003.
NIGOVIC, B.; SIMUNIC, B. Voltammetric assay of azithromycin in pharmaceutical dosage forms. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v.32, p.197 - 202, 2003.
SONG, Z.; WANG, C. Ultrasensitive assay of azithromycin in medicine and bio-fluids based on its enhanced luminol-H2O2 chemiluminescence reaction using flow injection technique. Bioorganic & Medicinal Chemistry, v. 11, p. 5375-5380, 2003.
THE UNITED STATES PHARMACOPEIA (USP) 28ª ed. Rockville, United States Convention, 2005.
TURCINOV, T.; PEPELJNJANK, S. Azithromycin potency determination: optimal conditions for microbiological diffusion method assay. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v.17, p.903 - 910, 1998.
ZUBATA, P.; CERESOLE, R.; ROSASCO, A.; PIZZORNO, M.T. A new HPLC method for azithromycin quantitation. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v.27, p.833 - 836, 2002.