ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: DESENVOLVIMENTO DE PROCEDIMENTO ANALÍTICO EM FLUXO PARA DETERMINAÇÃO DE GLICEROL EM BEBIDAS ALCOÓLICAS ARTESANAIS
AUTORES: MIRANDA, J.C. – CESI/UEMA; PEREIRA, A. C. – CESI/UEMA; FERNANDES, R. N. – UFMA; FERNANDES, E. N. - CESI/UEMA – UFMA
RESUMO: Um procedimento em análise em fluxo foi proposto para determinação de glicerol em bebidas alcoólicas artesanais empregando reações enzimáticas e detecção por espectrofotometria UV. O módulo de análise em fluxo empregou a enzima glicerol desidrogenase imobilizada em esferas de vidro com porosidade controlada em aminopropril. Após otimização dos parâmetros analíticos, obteve-se a curva analítica para o glicerol na faixa de concentração linear entre 5 a 25 % (m/v) de glicerol.; limite de detecção de 0,52 % (m/v) de glicerol; coeficiente de variação: 0,85 % (n=10). O sistema foi aplicado em amostras de bebidas artesanais tais como licores, tiquira e cajuina. Os resultados obtidos comparados com o kit comercial não apresentaram diferença significativa em nível de 95% de confiança.
PALAVRAS CHAVES: glicerol, reação enzimática, análise em fluxo
INTRODUÇÃO: O Glicerol, em geral, é o terceiro maior constituinte das bebidas fermentadas após a água e o etanol. A presença de glicerol nas bebidas fermentadas exerce uma influência assimilável nas características sápidas, contribuindo para o gosto doce. Entretanto, pesquisas revelam o uso da adição fraudulenta de glicerol. Nesse sentido, a quantificação de glicerol é um importante fator de controle de qualidade nas bebidas. No método oficial para determinação de glicerol é empregada a cromatografia líquida. Alternativamente, procedimentos para determinação de glicerol baseados em reações enzimáticas, têm sido propostos, empregadando diferentes técnicas de detecção [1-4]. Os sistemas de análise em fluxo são capazes de substituir com vantagens os processos manuais de preparação, separação, diluição, etc, reduzindo custos, tempo de análise e manipulação de amostras, levando a um menor risco de contaminação e perdas [5]. Neste trabalho, propõe-se a determinação de glicerol em bebidas artesanais tais como licores à base de frutas; a tiquira, bebida típica do Maranhão, obtida da fermentação da mandioca e cajuína, bebida obtida do caju.
MATERIAL E MÉTODOS: O procedimento proposto foi baseado em um módulo de análise em fluxo, que é constituído por um injetor comutador, tubos de tygon de diferentes diâmetros, tubos de polietileno. A detecção foi feita por um espectrofotômetro UV-VIS (FEMTO 700 PLUS), de absorção molecular, equipado com uma cela de fluxo em quartzo. Para propulsão de fluídos, foi utilizada uma bomba peristáltica ISMATEC IPC-8. Um microcomputador Pentium II, equipado com uma interface eletrônica (Advantech, PCL 711S) e um programa computacional escrito em linguagem Quick BASIC 4.5 foram empregados para aquisição de dados. A amostra foi inserida no fluído transportador tampão carbonato (pH 9,5), vazão 2,0 mL min-1, misturando-se com o reagente NAD+ (solução 6 x 10-3 mol L-1 , 1,0 min-1) por confluência, passando por um reator helicoidal. Em seguida a amostra passa por uma coluna contendo a enzima glicerol desidrogenase, imobilizada em esferas de vidro com porosidade controlada, que na presença do cofator NAD+ catalisa a reação de oxidação do glicerol produzindo dihidroxiacetona e NADH. A concentração de NADH produzido é diretamente proporcional à concentração de glicerol monitorado por espectrofotometria a 340 nm.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O procedimento proposto foi baseado em um módulo de análise em fluxo com configuração simples que permitiu o desenvolvimento de um procedimento analítico para determinação de glicerol empregando reação enzimática. Experimentos para otimização do procedimento resultaram nos seguintes parâmetros: volume da amostra: 50mL; bobina de reação: 50 cm e vazão de 2,0 mL/min. Após a otimização dos parâmetros analíticos, obteve-se a curva analítica para glicero na faixa de concentração linear entre 5 e 25 % (m/v) de glicerol.; limite de detecção de 0,52 mmol L-1; coeficiente de variação: 0,85 % (n=10). O sistema foi aplicado em amostras de bebidas artesanais regionais, tais como licores de frutas, tiquira e cajuina. Os resultados obtidos foram comparados com procedimento manual, empregando kit comercial, não apresentando diferença significativa em nível de 95% de confiança. As amostras apresentaram resultados dentro do parâmetros da legislação específica para bebidas alcoólicas.
CONCLUSÕES: O sistema em fluxo proposto para determinação de glicerol em bebidas alcoólicas fermentadas empregando reações enzimáticas e detecção por espectrofotometria permitiu a determinação do analito em amostras sem tratamento prévio. A reação enzimática, mostrou-se apropriada, principalmente pela seletividade proporcionada minimizando o efeito de possíveis interferentes dada à complexidade da composição química da matriz. O emprego da enzima imobilizada em esferas de vidro apresentou excelente estabilidade, mantendo sua atividade praticamente inalterada, permitindo ca 3000 determinações/imobilização
AGRADECIMENTOS:PIBIC/CNPQ; FAPEMA; CENA; UFMA
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA:1. MATAIX, E. & LUQUE DE CASTRO, M. D. “Simultaneous determination of ethanol and glycerol in wines by flow injection-pervaporation approach with in parallel photometric and fluorimetric detection”. Talanta, 51: 489, 2000.
2. MATSUMOTO, K.; MATSUBARA, H.; HAMADA, M. & OSAJIMA, Y. “Simultaneous determination of glucose, ethanol, glycerol and sulfite in white wine by flow-injection analysis including parallel configuration of immobilized enzyme columns” J. Japanese Soc. Food Sci. and Tech. 38(8): 699, 1991.
3. KIBA, N.; AZUMA, N. & FURUSAWA, M. “Chemiluminometric method for the determination of glycerol in wine by flow-injection analysis with co-immobilized glycerol dehydrogenase NADH oxidase” Talanta 43(10): 1761, 1996.
4. FERNANDES, E. N. MOURA, M. N. C. LIMA, J. L. C. REIS, B. F. “Automatic procedure for determination of glycerol in wine using enzymatic reaction and spectrophotometry”. Microchemical Journal, 77 107, 2004.
5. PASQUINI, C.; FACCHIN, I. “Extração de líquido-líquido em sistema de fluxo” Quim. Nova 21: 60, 1998.