ÁREA: Química Orgânica
TÍTULO: POTENCIAL ANTIMICROBIANO DE UM PEPTÍDEO DO ANURO HYPSIBOAS CINERASCENS
AUTORES: Almeida, R. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS) ; Koolen, H. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS) ; Silva, F. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS) ; Souza, A. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DO AMAZONAS) ; Costa, T. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS)
RESUMO: Os peptídeos provenientes das secreções cutânea dos anuros são substâncias
biologicamente ativas que fazem parte de seu sistema imune inato e funcionam como
primeiro mecanismo de defesa contra predadores e agente patogênicos e na maioria
das vezes não apresentam toxicidades em mamíferos. Nesse contexto verifica-se o
potencial dessas substâncias para uso farmacêutico já que muitos microrgânismos
causadores de várias doenças estão tornando-se cada vez mais resistêntes as drogas
utilizadas. Neste trabalho, será apresentada a o potencial antimicrobiano de um
novo peptídeo proveniente da secreção cutânea da espécie Hypsiboas cinerascens
contra bactérias (Staphylococcus aureus, Bacilus cereus Streptococcus mutans e
Xanthomonas axonopodis pv. Glycines) e fungo Candida Albicans
PALAVRAS CHAVES: Peptídeo; Hypsiboas; Antimicrobiano
INTRODUÇÃO: Secreções de pele de anfíbios, principalmente os pertencentes à ordem anura são
fontes ricas de substâncias biológicas que fazem parte de seu sistema imune
inato e possuem extraordinários efeitos farmacológicos (BRAND et al., 2002).
Destas substâncias, a que mais vem obtendo destaque no meio ciêntifico são os
peptídeos. Esses peptídeos são armazenados em glândulas serosas, e funcionam
como primeiro mecanismo de defesa contra predadores e agentes patogênicos (LEITE
et al., 2005). Tais substâncias são importantes e podem trazer benefícios
diretos ao homem, por serem potencialmente ativos contra um largo espectro de
microrgânismos patogênicos, e na maioria das vezes não apresentam toxicidade em
células normais de mamíferos, podendo assim, serem considerados grandes modelos
para produção de novos fármacos, principalmente nos dias atuais, já que muitos
microrgânismos causadores de várias doenças estão tornando-se cada vez mais
resistêntes as drogas utilizadas (PRATES et al., 2004). Por esse e outros
motivos torna-se necessario a busca de novos peptídeos que atuem e sirvam de
modelos para produção de novos fármacos.
MATERIAL E MÉTODOS: A análise da secreção cutânea de Hypsiboas cinerascens por Cromatografia de
Liquida de alta Eficiência (CLAE) e Espectrometria de Massa (EM) revelou uma
sequência peptídica de 25 resíduos (GVLDAIKAIAKAAGKAAIKAAGEHL-NH2) com C-
Terminal amidado (ALMEIDA et al., 2011). Essa sequencia foi confirmada por
comparação com sequências obtidas por estudo de RNA. E através da comparação de
sequencias depositadas no Banco de dados Protein Blast essa sequencia obteve 56%
de identidade com Hylaseptina P1 um peptídeo com atividade antimicrobiana já
descrita (PRATES et al., 2004). A partir desses dados esse peptídeo foi
escolhido para ser sistetizado, a síntese foi feita manualmente pelo método da
fase sólida, com a utilização de estratégia Fmoc (CHAN, et al., 2000). A síntese
completa do peptídeo durou aproximadamente 55 horas onde seus 25 resíduos foram
acoplados um por um, obteve-se aproximadamente 40 mg do peptídeo bruto. Foi
feita a analise por EM para confirmação da sequencia e purificação por CLAE do
peptídeo para os testes biológicos. Esses testes foram realizados no laboratório
do GEMMA, sob a supervisão da Professora Dra Antônia Queiroz Lima de Souza. Onde
2 mg dos peptídeos sintéticos puros, foram dissolvidos em 1mL de água Miili-Q,
para a realização dos ensaios contra bactérias Gram – positivas (Staphylococcus
aureus, Bacilus cereu e Streptococcus mutans) em meio sólido, para testes contra
Candida Albicans foram realizados por meio de um ensaio de diluição seriada, em
micro-placas de 96 poços partindo-se da concentração de 1 mg por mL-1. O
peptídeo também foi testado contra bactéria Xanthomonas axonopodis pv. Glycines
que foi realizado no SIBE EMBRAPA – Recursos genéticos e Biotecnologia – DF.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Nos ensaios realizados contra as bactérias Gram – positiva: Staphylococcus aureus,
Bacilus cereus e Streptococcus mutans o peptídeo obteve um bom resultado apesar de
ter sido feito apenas os ensaios qualitativos o peptídeos conseguiu inibir o
crescimento dessas bactérias o que mostra o seu potencial. No teste contra Candida
Albicans o peptídeo obteve um ótimo resultado conseguiu inibir o crescimento desse
fungo até concentração de 31,25µg/mL. E contra Xanthomonas axonopodis pv. Glycines
o peptídeo obteve um excelente resultado conseguiu inibir o crescimento dessa
bactéria com concentração abaixo de 4µg/mL.
CONCLUSÕES: O peptídeo identificado nesse trabalho por ser totalmente novo e por ter tido um
bom resultado nos ensaios biológicos preliminares, estimula a continuar com os
testes biológicos e confirma o potencial da espécie para estudos futuros, o que
reforça a viabilidade de se continuar com o estudo de peptídeos provenientes dos
anuros.
AGRADECIMENTOS: AO CNPQ, CAPES e a FAPEAM, pelo apoio financeiro
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: ALMEIDA, R. A; ARAÚJO, R. C; KOOLEN, H. H. F; SILVA, F. M. A; SOARES, E. R; Jr, B. C; SOUZA, A. D. L; COSTA, T. O. G. 2011. Estudo da secreção cutânea de uma espécie de anuro (Hypsiboas cinerascens) da Região Amazônica. SBQ
BRAND, G. D; LEITE, J. R. S. A; SILVA, L .P; ALBUQUERQUE, S.; PRATES, M. V;AZEVEDO, R. B; CARREGARO, V.; SILVA, J .S; SÁ, V. C. L; BRANDÃO, R. A.;
BLOCH JUNIOR, C. 2002. Dermaseptins from Phyllomedusa oreades and Phyllomedusa distincta. The Journal of Biological Chemistry, 277:49332-49340.
CHAN, W. C; WHITE, P. D. 2000. Fmoc solid phase peptide synthesis. A
practical approach. Oxford University Press, Oxford.
LEITE, J. R. S. A ; SILVA, L. P. ; RODRIGUES, M. I. S; PRATES, M. V; BRAND, G. D; LACAVA, B. M; AZEVEDO, R. B; BOCCA, A. L; ALBUQUERQUE, S; BLOCH Jr., C. 2005. Phylloseptins: a novel class of anti-bacterial and anti-protozoan peptides from the Phyllomedusa genus. Peptides, USA, v. 26 (4), p. 565-573
PRATES, M. V.; FORÇA, M. L. S.; REGIS, W. C. B.; LEITE, J. R. S. A.; SILVA, L. P.; PERTINHEZ, T. A.; ARAÚJO, A. L. T.; AZEVEDO, R. B.; SPISNI, A.; AND BLOCH, JR, C. 2004. The NMR-derived Solution Structure of a New Cationic Antimicrobial Peptide from the Skin Secretion of the Anuran Hyla punctata. The Journal of Biological Chemistry. Vol. 279, Nº 13: 13018 – 13026
