ÁREA: Iniciação Científica
TÍTULO: DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO INIBITÓRIA MÍNIMA DE CURCUMINA FRENTE À Saccharomyces cerevisiae
AUTORES: Melo, G.F. (UFU) ; Costa, N.J.S. (UFU) ; Hilario, M.A.S. (UFU) ; Garcês, B.P. (UFU) ; Oliveira, C.A. (UFU)
RESUMO: A inativação fotodinâmica é uma técnica fotoquímica que baseia-se na excitação de
uma droga atóxica fotossensibilizante através da luz, com comprimento de onda
adequado. E que na presença de oxigênio molecular, resulta na formação do oxigênio
singlete, uma espécie reativa do oxigênio capaz de inativar organismos vivos
através de necrose ou apoptose. Neste trabalho determinou-se a concentração mínima
de curcumina necessária para fotoinativar células de Saccharomyces cerevisiae para
avaliar se este corante possui ação fotosensibilizadora nestas condições. A
mortalidade celular foi quantificada utilizando-se o teste de viabilidade celular
com o corante resazurina.
PALAVRAS CHAVES: inativação fotodinâmica; curcumina; Saccharomyces cerevisiae
INTRODUÇÃO: A terapia fotodinâmica é um novo método para o tratamento clínico que se utiliza
da combinação de luz, oxigênio molecular e um corante, visando à destruição do
tecido vivo anormal. O princípio da interação desses três componentes desta
terapia está na exposição dos tecidos lesados a um composto não citotóxico
(fotossensibilizador), que absorve a energia transferida pela luz e sofre
excitação indo para seu estado ‘triplete’. Juntamente com o oxigênio presente na
célula, o fotosensibilizador poderá reagir com moléculas vizinhas, através de
transferências de elétrons, formando radicais livres ou por transferência de
energia ao oxigênio molecular, produzindo o oxigênio ‘singlete’, uma espécie
reativa da molécula.
Esse tipo de procedimento terapêutico tem sido cada vez mais utilizado no
tratamento contra o câncer, dermatoses como o câncer de pele, psoríase e
onicomicose, assim como na desativação de vírus, inativação de bactérias e
fungos. Uma vez que
os tratamentos; radioterapia, quimioterapia e cirurgia; classicamente utilizados
contra o câncer sejam eficientes contra muitos tipos de tumores, eles possuem
efeitos colaterais que viabilizam o uso de tratamentos alternativos, como a
terapia fotodinâmica. Devido à grande semelhança entre as células tumorais e as
células de Saccharomyces cerevisiae, buscou-se neste trabalho determinar
concentração inibitória mínima do corante curcumina (corante extraído do rizoma
seco de Curcuma longa L.) e avaliar se este possui atividade fotodinâmica nas
condições testadas. Estudos na literatura mostram que a curcumina possui uma
atividade antioxidante, porem alguns compostos como as cumarinas apesar de terem
estas características, podem ser pro-oxidantes em algumas concentrações.
MATERIAL E MÉTODOS: O objetivo deste trabalho foi determinar a menor concentração em que a curcumina
impossibilita o crescimento do fungo Saccharomyces cerevisiae, e para isso foi
utilizado o método de diluição em microplacas, devido à eficiência e maior
praticidade. Foram realizadas diluições sucessivas em microplacas, com 100 µL de
água em condições de esterilidade, com a droga a partir da concentração inicial
de 0,5 mM até a concentração 0,015 mM. A suspensão de fungos foi colocada de
acordo com o numero 1 da escala de McFarland que corresponde a aproximadamente
3x108 células e com quatro diluições de dez vezes tendo uma concentração mínima
de inoculo de aproximadamente 3x105 células. Após estas diluições, foram
colocados 100 µL da levedura, em cada poço contendo a droga, de forma que
pudesse ocorrer a interação entre eles durante 20 minutos. Em seguida, foi
adicionado o caldo BHI (brain heart infusion), de modo que possa, ou não,
ocorrer o crescimento dos fungos em um meio apropriado. As celulas foram
irradiadas no aparelho WE-IV construído no próprio laboratório que consiste em
um arranjo de 4 lâmpadas fluorescentes de 20 W cada durante 40 minutos. Controle
no escuro também foi realizado no mesmo intervalo de tempo. As celulas foram
colocadas em estufa a 37ºC por 48h para crescimento. Para a quantificação da
morte celular foi utilizado o corante resazurina, baseado em sua mudança de cor
devido ao seu potencial de oxi-redução. Foram colocados em cada poço 10uL do
corante e as celulas foram colocadas em estufa por mais 4h para posterior
leitura visual.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: As células de Saccharomyces cerevisiae foram inibidas pela curcumina, estando esta
nas concentrações 0,5 mM e 0,25 mM tanto na ausência de luz quanto na sua
presença. Em menores concentrações de droga não houve morte celular. Este efeito
foi observado em todas as concentrações do fungo no experimento. Deste modo, os
resultados obtidos mostram que a curcumina em maiores concentrações apresenta um
comportamento mais eficiente no combate ao fungo, sendo 0,25 mM a concentração
mínima em que ocorre a inibição celular e ela não apresenta atividade fototoxica
nestas condições.
CONCLUSÕES: Assim, conclui-se que a curcumina não é uma droga eficiente para a inativação
fotodinâmica, pois apresenta atividade citotóxica (ausência de luz) até a
concentração mínima encontrada. Mostra ser um eficaz fungicida (impossibilita o
desenvolvimento do fungo e inativa-o), porém a concentração necessária para
inativar as células inviabiliza a utilização desta droga in vivo, uma vez que a
concentração de curcumina utilizada é muito alta quando comparada à outras drogas
que em concentração bem menor, possuem o mesmo efeito.
AGRADECIMENTOS: Agradecemos à CNPq, FAPEMIG, CAPES e IQUFU
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: DIAZ-RUIZ, R. et al.; Biochimica et Biophysica Acta, 19807 (2001) 568-576.
MACHADO, A. E. H.; 2000. Química Nova, 23: 237-243.
TARDIVO, J. P. et al.; Photodiagnosis and Photodynamic Therapy, 2005, 2, 175-191.
