ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: SISTEMA EM FLUXO PARA DETERMINAÇÃO DA PROTEÍNA DO SORO DO LEITE
AUTORES: Oliveira, R.S. (UEMA) ; Albuquerque, M.C.M. (UEMA) ; Fernandes, E.N. (UEMA/UFMA)
RESUMO: O leite é um importante alimento para as crianças e adultos. Este trabalho propõe-
se um sistema de análise em fluxo para a determinação de proteínas do soro do
leite, Entre as proteínas que formam o leite, 20% são representadas pelas
proteínas do soro, muito utilizado pela indústria de lacticínios. Foi empregado um
método do Biureto, com detecção espectrofotométrica em 540 nm. O sistema
apresentou resposta linear na faixa de concentração de 0,2 a 1,0 g/L de proteína.
PALAVRAS CHAVES: Análise em Fluxo; Proteína ; Soro
INTRODUÇÃO: O leite, especialmente, parece ocupar uma posição importante entre os vários
alimentos por ser o único alimento para os humanos e todos os mamíferos durante
a primeira parte de suas vidas. Assim, o leite contém tudo o que o organismo
jovem necessita para o crescimento e desenvolvimento, incluindo, em particular,
suficiente concentração de proteínas e minerais (MAIJOLA, 2000). Sistemas de
análise em fluxo têm sido utilizados principalmente para a mecanização do
sistema de análises químicas. Empregando esses sistemas é possível obter
praticamente todas as etapas envolvidas no processo de análise química, e
apresentar grande potencialidade em parâmetros físico-químicos (ROCHA, 1999). O
método Sistema de Análise em Fluxo(FIA) apresenta uma excelente capacidade
analítica no que se refere à
rapidez e precisão possibilitando maior taxa de determinação menor gasto de
reagente e diminuição de interferência. O sistema em discussão apresenta-se,
ainda, com custos relativamente baixos, são úteis em processos de automatização
e miniaturização de instrumentos de análises. (REIS, 1996).
MATERIAL E MÉTODOS: O módulo de análise foi constituído por injetor comutador, tubos de Tygon® de
diferentes diâmetros, tubos de polietileno (0,8 mm d.i). A detecção foi feita
por um espectrofotômetro (Femto UV-Vis modelo 432) equipado com uma cela de
fluxo. Foi utilizada uma bomba peristáltica (Ismatec IPC-8), para propulsão dos
fluidos. As soluções foram preparadas com água destilada, utilizando reagentes
de grau analítico. Para os estudos de otimização do sistema e obtenção de curva
analítica foram utilizadas soluções de referência empregando albumina de soro
bovino purificada, disponível comercialmente, contendo uma concentração de 0,6%
de albumina bovinos. Todos os experimentos de otimização do sistema foram
realizados empregando-se o módulo de análise apresentado no gráfico 1. O
procedimento analítico empregado será o método espectrofotométrico do Biureto
(GORNALL, 1949), adaptando-se as reações ao sistema de análise em fluxo e
detecção por espectrofotometria de absorção molecular em amostras de soro de
leite de vaca selecionadas para o estudo. A obtenção do soro de leite assim como
o procedimento para a determinação de proteína total será feita empregando
procedimento recomendado por Pereira Neto et al (2011).Amostras de soro do leite
serão preparadas a partir de 200 mL de leite bovino aquecido a 45ºC, aos quais
serão adicionados 10,0 mL de ácido acético P.A., para precipitação total da
caseína. Após filtração da caseína em papel de filtro, o soro foi centrifugado a
6000 rpm por 30 min e utilizado para determinações de proteína.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Primeiramente foram feitos experimentos para otimização do método para
determinação de proteína em soro de leite empregando análise em fluxo. Foram
estudadas variações da vazão, do comprimento da alça de amostragem, da bobina de
reação e do comprimento de onda. As melhores condições encontradas foram:
comprimento de onda de 540nm; bobina de reação de 40cm; alça de amostragem 15 cm
e vazão 0,6 mL/min. Com o sistema otimizado foi construída uma curva analítica
na faixa de 0,2 a 1,0 g/L de proteína, gráfico 2. Em seguida foram analisadas
amostras dos soros de leite do tipo C e UHT. Os resultados revelaram que os
soros do leite tipo C apresentam teores de proteína superiores aos do leite UHT.
Os resultados obtidos foram comparados com o método manual e não apresentaram
diferença significativa em nível de 95 %.
Gráfico 1: Otimização do Sistema
O gráfico apresenta as melhores condições
operacionais para o sistema:Condições:540nm, alça
de amostragem=15cm , bobina de reação=40cm e vazão
0,6mL.
Gráfico 2: Curva Analítica da proteína do leite
Faixa de concentrações: 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 e 1g/L. O
gráfico apresenta uma resposta linear de proteínas
nas concentrações acima para o soro do leite.
CONCLUSÕES: Ao térmico deste trabalho, conclui-se que o sistema de análise em fluxo empregando
o método do biureto é eficiente para determinação de proteína em soro de leite,
aliando todas as vantagens da análise em fluxo: rapidez, maior frequência
analítica, menor geração de resíduos e não exige contato direto com o analista.
AGRADECIMENTOS: CESI/UEMA Universidade Estadual Do Maramhão
LPQA – Laboratório De Pesquisa De Química Analítica
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: GORNALL, A.G.; BARDAWILL, C. J; DAVID, M. M.; Determination of serum proteins by means of the biuret reaction. J. Biol. Chem. 177:751-66, 1949.
MAIJOLA, kalle, leite de vaca e desenvolvimento e bem estar humano. capitulo 2.
PEREIRA NETTO, A. D.; MARQUES, F. F. C.; SEMAAN, F. S.; MARSICO, E. T.; ANDRADE, A. A. A.; PALMA, J. K. Comparação entre métodos clássicos para determinação de proteínas em soro de leite bovino. 34ª Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química – SBQ, maio, 2011.
REIS, B. F. Análise química por injeção em fluxo: vinte anos de desenvolvimento. Química Nova, v. 19, n. 1, p. 51 – 58. Ago. 1996.
ROCHA, F.R. P, experimentos didáticos utilizando sistema de análise por injeção em fluxo. Universidade Federal de São Carlos, Departamento de Química, 1999.
