ÁREA: Produtos Naturais
TÍTULO: DETERMINAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE EXTRATOS DO FUNGO ENOFÍTICO Colletotrichum gloeosporioides, FUNGO ENDOFÍTICO DE Indigofera suffruticosa Mill.
AUTORES: Santos, I.P. (UFPE) ; Oliveira, W.C.R. (UFPE) ; Silva, A.P.S. (UFPE) ; Ribeiro, I.A.T.A. (UFPE) ; Cavalcanti, M.S. (UFPE) ; Lima, V.L.M. (UFPE)
RESUMO: Colletotrichum gloeosporioides é um fungo endofítico comumente isolado de
diversas plantas, sendo apontado em diversos estudos como produtor de moléculas
com atividades biológicas. Nesse trabalho o fungo C. gloeosporioides,
isolado de Indigofera suffruticosa, foi fermentado em meio de arroz de
onde foram obtidos extratos em diferentes períodos de cultivo. Esses extratos
foram avaliados quanto a atividade antimicrobiana, através da técnica de difusão
em disco, frente a bactérias Gram-positivas e negativas e fungos, apresentando
capacidade de inibir os três grupos de microrganismos testados. Esses resultados
demonstram que o fungo C. gloeosporioides, isolado de I.
suffruticosa, se apresenta como uma fonte promissora na descoberta de novos
antibióticos.
PALAVRAS CHAVES: C. gloeosporioides; atividade antimicrobiana; endofítico
INTRODUÇÃO: As plantas podem servir como reservatório de inúmeros microrganismos conhecidos
como endofíticos. Por definição, estes microrganismos vivem nos espaços inter e
intracelulares do tecido vegetal sem causar danos (AZEVEDO et. al., 2000).
Endofíticos representam uma vasta diversidade de adaptações microbianas que se
desenvolveram em ambientes especiais e incomuns, e sua diversidade e habitações
especializadas os tornaram uma ótima fonte de estudos e pesquisa por novas
drogas (ALY et al. 2010; BANDARA, et. al, 2006; GUO et al., 2008), dentre esses
destaca-se o fungo C. gloeosporioides, o qual é frequentemente relatado
como patógenos causadores de antracnose em vegetais em todo o mundo (FREEMAN et
al., 1996), mas também é apontado como promissor na produção de metabólitos de
interesse para a indústria farmacêutica (LU et. al., 2000; ARIVUDAINAMBI et.
al., 2011). A busca por endofíticos específicos que possam produzir antibióticos
tem sua origem na etnobotânica, a qual utiliza a medicina tradicional de povos
nativos (STROBEL, 2003). Muitos endofíticos isolados de plantas medicinais têm
se mostrado produtores de metabólitos secundários com forte atividade fungicida
e bactericida (GUNATILAKA, 2006; TAN & ZOU, 2001). O importante caráter
medicinal da planta I. suffruticosa embasa a pesquisa da sua micobiota
endofítica envolvida na produção de compostos bioativos,onde o objetivo do
presente estudo foi investigar a produção de compostos antimicrobianos, que
apresentam atividade antagônica contra bactérias e fungos patogênicos ao homem,
pelo fungo C. gloeosporioides isolado de folhas de I.
suffruticosa.
MATERIAL E MÉTODOS: 10 Erlenmeyers, contendo cada 90g de arroz e 75 mL de água destilada, foram
autoclavados por 45 minutos a 121°C. Cubos de meio BDA contendo o micélio de
C. gloeosporioides foram adicionados em 8 Erlenmeyers, sendo os outros
dois utilizados como controle. Decorridos 7, 14, 21 e 28 dias de crescimento a
30°C foi adicionado metanol (300 mL) em cada dois Erlenmeyers e, após cinco
horas, esse metanol foi filtrado e evaporado obtendo-se o extrato metanólico. Os
extratos foram ressuspendidos com DMSO, obtendo-se uma concentração de 100
mg/mL, e submetido ao teste de atividade antimicrobiana. Dos microrganismos
testes, 05 foram fungos: Candida albicans; Candida tropicalis;
Malassezia furfur e Trichopyton cutaneum, obtidos Micoteca –URM do
Departamento de Micologia, UFPE, Recife, PE, e 05 bactérias obtidas da Coleção
de Culturas UFPEDA, Departamento de Antibióticos, UFPE, Recife, PE, sendo duas
bactérias gram-positivas (Staphylococcus aureus e Bacillus
subtilis) e três gram-negativas (Escherichia coli; Klebsiella
pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa). A atividade antimicrobiana foi
avaliada pelo método de difusão em disco de papel, onde discos de 6 mm de
diâmetros foram impregnados com 30 µL do material ressuspendido e colocados
sobre a superfície do meio Müeller-Hinton, semeados com os microrganismos teste
os quais foram suspensos previamente em soro fisiológico até turbidez de 0,5 da
escala McFarland. Como controle foi usado DMSO e o meio arroz. As placas foram
incubadas a 37 °C durante 24 horas (bactéria) e 30 °C durante 24-48 horas
(fungos). Os testes foram realizados em triplicatas e os resultados das médias
do diâmetro dos halos de inibição expressos em milímetros (mm) (BAUER et al,
1966).
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O rendimento dos extratos obtidos após 7, 14, 21 e 28 dias de cultivo foram,
respectivamente, 0,1608g, 0,2185g, 0,2432g e 0,0878g, para cada 90g de arroz
utilizado como substrato, demonstrando que o pico de crescimento micelial
ocorreu após 21 dias de cultivo, estando esse crescimento ligado à produção de
moléculas com atividade antimicrobiana, pois os melhores resultados foram
obtidos após transcorrido o mesmo período de cultivo (Tabela 1), indicando que a
biossíntese de metabólitos secundários foi ativada na fase final do crescimento
ou já na fase estacionária da fermentação, quando, segundo YARBROUGH et. al.
(1993), a divisão celular e a produção de biomassa ocorrem em níveis muito
baixos. Os extratos obtidos mostraram capacidade de inibir sete dos nove
microrganismos testados (Tabela 1), com destaque para a bactéria Gram-positivo
B. subtilis (15 mm) e para os fungos C. tropicalis (19mm), M.
furfur (19mm) e T. cutaneum (19mm). Segundo AWADH at al (2001) são
considerados satisfatórios halos maiores ou iguais a 10mm. De acordo com os
critérios adotados por este autor os extratos obtidos a partir da fermentação do
fungo endofítico C. gloeosporioides inibiu de forma satisfatória os
microrganismos testados, exceto E. coli e K. pneumoniae. LEITE et.
al. (2006) constatou a atividade antimicrobiana do extrato de folhas de I.
suffruticosa. Este caráter medicinal pode estar intimamente ligado aos
metabólitos secundários dos fungos endofíticos que habitam as folhas, entre eles
o C. gloeosporioides, uma vez que o gênero Colletotrichum sp. é
apontado como produtor de metabólitos capaz de inibir o crescimento de diversos
patógenos humanos (LU et. al., 2000; ARIVUDAINAMBI et. al., 2011).
Tabela 1
Médias em mm dos halos de inibição do extrato metanólico do fungo endofítico Colletotrichum gloeosporioides em diferentes períodos de cultivo.
CONCLUSÕES: Nossas observações sugerem que o fungo endofítico C. gloeosporioides, isolado da
planta I. suffruticosa possue potencial farmacêutico, uma vez que este fungo
caracterizado quanto a isto mostrou atividade contra patógenos humanos, podendo
este isolado ser considerado como alvo atrativo para estudos posteriores visando
identificar os compostos com potencial biotecnológico através de análises químicas
e biológicas.
AGRADECIMENTOS: A Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco – FACEPE
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