ÁREA: Produtos Naturais
TÍTULO: ESTUDO FITOQUÍMICO E AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIOXIDANTE DO EXTRATO METANÓLICO DO LÁTEX DO LEITE DE AMAPÁ DAS ESPÉCIES Parahancornia amapa e Brosimum parinarioides
AUTORES: Silva, P.S.P. (INPA) ; Salles, R.C.O. (INPA) ; Nunomura, S.M. (INPA) ; Nunomura, R.C.S. (UFAM)
RESUMO: Os amapazeiros são árvores produtoras de látex, utilizados pela medicina popular
como agentes terapêuticos para tratamento de diversas doenças. O presente
trabalho tem por objetivo realizar o estudo fitoquímico e avaliar a atividade
antioxidante nos extratos metanólicos obtidos do látex do leite de Amapá de duas
espécies de amapazeiro, empregando métodos cromatográficos e partição líquido-
líquido, onde foi possível identificar significativa quantidade de substâncias
fenólicas nas frações acetato de etila das duas espécies, possivelmente taninos,
com um alto teor de atividade antioxidante. Ao realizar ensaio de quantificação
de fenólicos totais, verificou-se que a espécie B.parinarioides apresentou maior
teor de atividade antioxidante na fração de acetato de etila do que a outra
espécie.
PALAVRAS CHAVES: Parahancornia amapa; Brosimum parinarioides; Amapazeiro
INTRODUÇÃO: As plantas representaram durante séculos, a única fonte de agentes terapêuticos
para o homem. Várias espécies têm sido largamente utilizadas na medicina
popular, empregadas a partir do conhecimento tradicional das populações. A
região Amazônica possui uma grande biodiversidade, incluindo plantas medicinais
utilizadas no tratamento de diversas doenças pelas populações locais. Dentre
estas variedades de plantas medicinais, destacam-se os amapazeiros que são
árvores produtoras de látex, pertencentes a duas espécies botânicas distintas
Parahancornia amapa, pertencente à família Apocynaceae, e Brosimum
parinarioides, uma espécie da família Moraceae. O leite de Amapá tem seu
principal uso na Amazônia como agente cicatrizante e anti-inflamatório, atuando
principalmente no trato respiratório e no tratamento de gastrite. (Borrás, 2003;
Matta, 2003; Mors et al., 2000; Shanley et al.,2005). Visando a identificação
dos principais componentes químicos presentes nestas espécies, estudos
desenvolvidos anteriores descrevem uma grande quantidade de mistura de
carboidratos, de metilmioinositol e derivados de feniletanóides tendo como
principal constituinte o cornosídeo no extrato metanólico de Parahancornia amapa
(Velloso, 2001; Carvalho et al.,2008). A partir de B. parinarioides, os estudos
realizados atestaram a presença de alcalóides, antraquinonas, derivados de
cumarina, purinas, esteróides e triterpenóides. No extrato metanólico das cascas
de B. parinarioides, observou-se uma maior atividade antioxidante nas frações
mais polares (Yano et al., 2007; Quadros et al.,2008).
MATERIAL E MÉTODOS: Os extratos foram preparados inicialmente suspendendo cada amostra de látex em
metanol, em seguida os mesmos foram filtrados utilizando funil de Büchner, e
depois concentrados, obtendo o extrato metanólico. Em seguida, o resíduo obtido
foi novamente suspenso utilizando-se diclorometano, dando origem ao extrato DCM.
Com cada extrato metanólico obtido das duas espécies, realizou-se um
fracionamento por partição líquido-líquido, onde as amostras foram inicialmente
solubilizadas em uma mistura de metanol e água na proporção de 7/3 em volume.
Essa solução foi transferida para um funil de separação e particionada com
diclorometano. Em seguida, foi feito o mesmo procedimento com a fração
hidroalcoólica, utilizando acetato de etila como solvente extrator. Para fins de
comparação, foram feitas análises cromatográficas em CCD das frações obtidas
desse fracionamento. As fases acetato de etila (AcOEt) das duas espécies foram
submetidas cada uma a um fracionamento cromatográfico, em coluna de permeação em
gel empacotada com Sephadex LH-20 com o intuito de separar essas frações de
acordo com o tamanho de seus constituintes.
Com cada extrato e fração obtida de cada uma das duas espécies, realizou-se
ensaio de fenólicos totais, quantificado a partir de uma curva de calibração
utilizando padrão de ácido gálico em diferentes concentrações. O ensaio consiste
em transferir 200 µL da solução padrão de ácido gálico, extrato ou fração para
um frasco âmbar e adicionar cerca de 1,5 mL do reagente Folin-Ciocalteau
(diluído 10 vezes) e aguardar por 5 minutos, após isso adicionar mais 1,5 mL de
solução de bicarbonato de sódio (6%) e aguardar por 90 minutos. Após o termino
da reação, mede-se a absorbância no comprimento de onda a 725nm. O branco é
obtido apenas com 3,0 mL de água mili-Q.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Das análises em CCD, verificou-se que as frações acetato de etila das espécies
P.amapa e B.parinarioides apresentaram atividade antioxidante quando reveladas
com DPPH e β-caroteno, além da presença de flavonoides quando reveladas com NP-
PEG. Devido às frações AcOEt das duas espécies terem apresentado resultado
positivo para atividade antioxidante, decidiu-se realizar, com as mesmas, um
fracionamento em permeação em gel, utilizando Sephadex LH-20 que tem a
capacidade de separar essas frações de acordo com o tamanho de seus
constituintes, onde foi possível observar através dos pesos, que as primeiras
sub-frações obtidas de cada fracionamento (fração 1-10) contendo substâncias de
maior peso molecular, representam cerca de 95% da fração AcOEt de P. amapa e
89,8 % da fração AcOEt de B. parinarioides. As análises realizadas em CCD
utilizando reveladores químicos para análise de antioxidantes como DPPH,
demonstram que as frações AcOEt obtidas dos extratos metanólicos das duas
espécies, apresentam uma grande quantidade de atividade antioxidante presentes
em substâncias macromoleculares, possivelmente taninos, e apenas uma pequena
fração de atividade antioxidante presentes e substâncias micromoleculares. Dos
ensaios de quantificação de fenólicos totais, realizados com cada um dos
extratos e frações obtidas do látex do leite de amapa das duas espécies, foi
possível obter os resultados descritos nas tabelas 1 e 2. Como descrito por Yano
et al., 2007 e Quadros et al.,2008 observa-se que a espécie B.parinarioides
apresenta uma maior concentração de fenólicos totais, principalmente no extrato
MeOH, DCM e na fração AcOEt que corresponde a uma fração de alta polaridade com
relação a fração DCM. A espécie P. amapa apresentou uma significativa
concentração apenas na fração AcOEt.
CONCLUSÕES: Os resultados obtidos neste trabalho, demonstram uma grande quantidade de
substâncias de maiores pesos moleculares possivelmente taninos, nas frações
acetato de etila obtidas do extrato metanólico do látex do leite de amapa das duas
espécies de amapazeiro, Parahancornia amapa e Brosimum parinarioides,apresentando
um grande teor de atividade antioxidante. De acordo com o ensaio de quantificação
de fenólicos totais, a espécie Brosimum parinarioides, apresentou maior
concentração de fenólicos totais, na fração AcOEt, e no extrato MeOH com relação a
outra espécie.
AGRADECIMENTOS: A FAPEAM e ao INPA pelo apoio financeiro e pela oportunidade da realização deste
trabalho, sendo aqui apresentado.
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