ÁREA: Produtos Naturais
TÍTULO: CARACTERIZAÇÃO DOS PRINCIPAIS FOSFOLIPÍDIOS PRESENTES NA CASTANHA DO BRASIL (BERTHOLLETIA EXCELSA) POR ESI-IT-MSn.
AUTORES: Lima, B.R. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS) ; Silva, F.M.A. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS) ; Koolen, H.H.F. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS) ; Almeida, R.A. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS) ; Souza, A.D.L. (UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS)
RESUMO: A castanha do Brasil (), espécie nativa da Região Amazônica, é
considerada um produto de grande valor econômico, sendo um alimento largamente
apreciado por suas qualidades nutritivas. Embora existam estudos sobre a
composição bioquímica das castanhas do Brasil, são poucos os que documentam
sobre a presença de fosfolipídios, compostos com notórios efeitos fisiológicos
benéficos. O presente trabalho teve por objetivo caracterizar os principais
fosfolipídios presentes nas sementes da castanha do Brasil através do uso de
sistema ESI-IT-MS em conjunto com o uso de SPE (C-18) durante o
preparo das amostras. 8 fosfolipídios, sendo 4 do tipo PI (fosfatidilinositol) e
4 do tipo PA (ácido fosfatídico), puderam ser caracterizados com base no seu
padrão de fragmentação.
PALAVRAS CHAVES: Bertholletia excelsa; Fosfolipídios; ESI-IT-MSn
INTRODUÇÃO: A castanha do Brasil ( - Lecythidaceae) é uma espécie típica da região
Amazônica (EMBRAPA, 2004). É considerado um produto de grande valor econômico
devido ao aproveitamento de suas amêndoas por seu valor nutritivo (APIZ, 2008).
Pesquisas recentes revelaram a presença de fosfolipídios no óleo da castanha do
Brasil (CHUNHIENG et al.,2008). Os fosfolipídios são na sua maioria compostos de
glicerofosfolipídios que são classificados pela sua grupo de cabeça polar,
contendo um éster de fosfato no glicerol na posição sn-3 (YAN et al.,2010).
Estes compostos têm sido utilizados como suplementos nutricionais, onde têm
mostrado efeitos fisiológicos benéficos, são importantes na manutenção da
integridade da membrana celular e desempenham um papel significativo na
permeabilidade da membrana (HERCHI et al., 2011). Visto que os fosfolipídios são
compostos que apresentam potencial benéfico à saúde, justifica-se através do
exposto acima a investigação dos mesmos nas castanhas comercializadas na cidade
de Manaus, visando contribuir para o conhecimento fitoquímico da espécie.
MATERIAL E MÉTODOS: As amostras foram coletadas na feira da Manaus moderna, Manaus- AM. As castanhas
foram separadas em sementes e casca marrom, sendo em seguida trituradas (TE-102
Tenal) separadamente. Posteriormente as amostras foram desengorduradas em Hexano
(1:5 w/v, 5 min x 3). Logo após o desengraxe, o material foi seco ao ar. O
material resultante foi extraído com acetona 70% (10 g de amostra /100 mL de
solvente) através de agitação vigorosa (Shake Solab ) a 50 C por 30
min. O material resultante foi centrifugado a 4000g (centrifuge 5810 R) por 15
min, sendo o sobrenadante coletado. O resíduo foi re-extraído duas vezes sob
mesmas condições. Os sobrenadantes foram combinados e concentrados em evaporador
rotatório. Em seguida a amostra foi submetida a extração em fase sólida (C-18)
conforme a metodologia descrita a seguir: O cartucho de SPE foi inicialmente
ativado através da passagem de metanol HPLC. Posteriormente foi condicionado em
sistema aquoso (5% metanol). Em seguida as amostras foram passadas através da
SPE. A SPE foi eluida com 3 mL de metanol HPLC, sendo os dois primeiros mL
coletados em Eppendorf (2 mL). A fração foi seca em dessecador. As amostras
foram preparadas em metanol grau HPLC (5 ppm) e analisadas por infusão direta em
sistema ESI-IT-MS.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: No espectro de íons totais do modo negativo foram observados principalmente íons
de elevada massa molecular (Figura 1). Através da analise do padrão de
fragmentação destes íons em conjunto com o conhecimento químico prévio da
castanha do Brasil (CHUNHIENG et al .,2008), suspeitou-se se tratarem de
fosfolipídios. Na figura 2 é possível observar perdas neutras (P.N.) de 282 e
280 Da, atribuídas respectivamente aos substituintes (R2), ácido oléico e ácido
linoléico, substancias majoritárias na constituição dos óleos das castanhas do
Brasil (CHUNHIENG et al ., 2008). Ainda através do estudo de fragmentação, foram
observadas perdas (P.N) de 162 e 136 Da, as quais foram fundamentais para
classificar estas substâncias como fosfolipídios do tipo PA (ácido fosfatídico)
e PI (fosfatidilinositol), visto estes fragmentos serem característicos destas
classes de fosfolipídios (HSU et al .,2000). Estudos anteriores demonstraram que
estas classes de fosfolipídios aparecem como principais constituintes dos óleos
da castanha do Brasil (CHUNHIENG et al.,2008). Conhecendo as classes de
fosfolipídios presente, assim como um dos substituintes graxos (R2), foi
possível predizer o segundo substituinte graxo (R1) (Figura 2) com base na
diferença de massa observada, em conjunto com o conhecimento prévio dos
constituintes graxos presentes no óleo das castanhas do Brasil (CHUNHIENG et
al.,2008).
Figura 1
Principais íons observados na fração orgânica da
semente no modo negativo e seus respectivos
fragmentos.
Figura 2
Ácidos graxos constituintes dos fosfolipídios do
tipo PI e PA identificados por MS.
CONCLUSÕES: A aplicação de SPE (C-18) não só removeu interferentes da matriz, como também
extraiu seletivamente os principais fosfolipídios presentes nas castanhas do
Brasil, o que simplificou a investigação espectrométrica. O conhecimento prévio do
padrão de fragmentação das classes de fosfolipídios descritos neste trabalho em
conjunto com o conhecimento químico prévio das castanhas do Brasil foi fundamental
para caracterizar os 8 fosfolipídios aqui descritos.
AGRADECIMENTOS: A FAPEAM e ao CNPQ, pelo apoio financeiro aos trabalhos realizados e aqui
parcialmente apresentados.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: APIZ ,2008. Boas Práticas de Coleta, Armazenamento e comercialização da Castanha- do Brasil, Cuiabá.
CHUNHIENG,T. ; HAFIDI, A . ;PIOCH, D. ; BROCHIER ,J. ;MONTET ,J. 2008. Detailed Study of Brazil Nut (Bertholletia excelsa) Oil Micro-Compounds:Phospholipids, Tocopherols and Sterols. J. Braz. Chem. Soc,19 : 1374-1380.
EMBRAPA, 2004. Manual de Segurança e Qualidade para a Cultura da Castanha-do-Brasil . 61 p, Brasília.
HERCHI , W. ; SAKOUHI,F.; KHALED,S.; XIONG , Y. 2011. Characterisation of the glycerophospholipid fraction in flaxseed oil using liquid chromatography–mass spectrometry. Food Chemistry, 129: 437–442 .
HSU,F.; TURK, J. 2000. Characterization of Phosphatidylinositol,Phosphatidylinositol-4-phosphate, and Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate by Electrospray Ionization Tandem Mass Spectrometry: A Mechanistic Study. Journal of the American Society for mass Spectrometry, 11: 986–999.
YAN,X.; LI,H.; ZHOU,C. 2010. Analysis of phospholipids in microalga Nitzschia closterium by UPLC-Q-TOF-MS. Chinese Journal of Oceanology and Limnology, 281 :106-112.
