ÁREA: Nanociência e Nanotecnologia
TÍTULO: DETERMINAÇÃO SIMULTÂNEA DE SINVASTATINA E LOVASTATINA EM NANOCÁPSULAS POLIMÉRICAS POR UM MÉTODO CROMATOGRÁFICO
AUTORES: Diedrich, A. (UNIFRA) ; Gomes, P. (UNIFRA) ; Lorenzoni, R. (INVENTIVA) ; Raffin, R. (UNIFRA) ; Barbosa, G. (UNIFRA)
RESUMO: O presente trabalho teve por objetivo desenvolver e validar um método
cromatográfico indicativo de estabilidade para determinação simultânea de
sinvastatina e lovastatina em nanocápsulas poliméricas (NC). A fase móvel foi
composta por acetonitrila e água Milli-Q (60:40 v/v, pH 4,5), fluxo 1,5 mL/min e
detecção a 238 nm. A validação deste método foi realizada através da
espe¬cificidade, linearidade, precisão intermediária e repetibilidade, exatidão,
limite de detecção e limite de quantificação. A estabilidade das NC foi avaliada
através de testes de degradação hidrolítica e oxidativa. O método desenvolvido
mostrou ser simples, específico, linear, preciso e exato. Os estudos de
estabilidade permitiram constatar que as NCSV são mais estáveis que os fármacos
em sua forma livre.
PALAVRAS CHAVES: NANOCÁPSULAS; ESTATINAS; DOENÇA DE ALZHEIMER
INTRODUÇÃO: Com o aumento da expectativa de vida da população em geral, houve um aumento na
prevalência de doenças que acometem esta população e entre elas encontram-se as
demências. A Doença de Alzheimer (DA) é uma demência que acomete milhões de
idosos (UPADHYAY et al., 2010). Em virtude da possível relação entre elevados
níveis de colesterol plasmático e o desenvolvimento da DA, as estatinas, como a
sinvastatina (SV) e lovastatina (LV) se mostram possíveis formas de tratamento.
Entretanto, os fármacos (SV e LV) em suas formas livres não atravessam
significativamente a barreira hematoencefálica (BHE), além de apresentarem
alguns efeitos colaterais significativos (PETANCESKA et al., 2002; MOST et al.,
2009). Atualmente utilizam-se os nanocarreadores para facilitar a passagem do
fármaco pela BHE e diminuir a incidência dos efeitos colaterais. Desta forma,
nanocápsulas (NC) contendo SV e LV mostram-se fortes agentes terapêuticos frente
à DA (ALAM et al., 2010). Entretanto, na fase de elaboração de um produto como
as NC poliméricas de estatinas, é fundamental o desenvolvimento de um método
indicativo de estabilidade (BRASIL, 2003). Estes estudos poderão servir para o
desenvolvimento de uma forma farmacêutica e contribuirão para a promoção da
segurança para os pacientes em tratamento com DA. Por este motivo, é de extrema
importância a avaliação quantitativa e de estabilidade destes fármacos nas NC.
Para tais determinações, utiliza-se cromatografia à liquido de alta eficiência
(CLAE). Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar um
método cromatográfico indicativo de estabilidade para determinação simultânea
das estatinas nas NC.
MATERIAL E MÉTODOS: Para realização deste trabalho, foi utilizado o cromatógrafo a liquido de alta
eficiência YL9100. A fase móvel foi composta por mistura de acetonitrila e água
Milli-Q (60:40, v/v pH 4,5 ajustado com ácido acético glacial). O fluxo
estabelecido foi de 1,5 mL/min com detector ajustado a 238 nm. O tempo de
análise total foi 15 minutos. A validação deste método foi realizada através de
estudos quanto à especificidade, linearidade, precisão intermediária e
repetibilidade, exatidão, limite de detecção e limite de quantificação, conforme
preconizado pela RDC 899/03 (BRASIL, 2003) e pela International Conference on
Harmonization (ICH, 2005). A estabilidade das nanocápsulas foi avaliada através
de testes de degradação hidrolítica e oxidativa em tempos de zero e 15 minutos.
A degradação hidrolítica foi realizada com solução de NaOH 0,1M e HCl 0,1M
associado a temperatura de 60ºC. A degradação oxidativa foi realizada com
peróxido de hidrogênio 3% a 60ºC.
RESULTADOS E DISCUSSÃO: O método descrito foi linear na faixa de concentração de 2.0-18.0 µg/mL para a
determinação simultânea de SV (r= 0,9991) e LV (r= 0,9996). A precisão foi
avaliada pelo desvio padrão relativo (DPR) obtido intra-dia (DPR= 2,24; SV e
DPR= 1,61; LV) e inter-dia (DPR= 3,62; SV e DPR= 0,19; LV). O teste de
recuperação apresentou uma faixa de 98,49-101,41% para SV e de 98,06-101,52%
para LV. O limite de detecção foi de 0,51 µg/ml (SV) e 0,15 µg/ml (LV), já o
limite de quantificação foi 1,35 µg/ml (SV) e 0,41 µg/ml (LV). A especificidade
foi avaliada através de degradação hidrolítica e oxidativa de NCSV e NCLV, na
Tabela 1 podemos observar o decaimento do teor dos fármacos quando colocados em
situações de stress. A avaliação de estabilidade de produtos como as NC
poliméricas contendo estatinas é de extrema importância para manter a segurança
dos pacientes em tratamento. No entanto, poucas monografias existentes em
farmacopeias incluem metodologias para análise de produtos de degradação, e
poucos fabricantes conhecem e desenvolvem metodologias validadas para detecção e
quantificação destes produtos. Chaudhari et al (2007) desenvolveram um método
cromatográfico indicativo de estabilidade para analise simultânea de SV e
ezetimibe, onde foi possível visualizar que a SV se degrada principalmente em
meio alcalino. Este fato também foi verificado através dos resultados obtidos em
nosso estudo, onde os dois fármacos SV e LV, bem como as NCSV e NCLV
apresentaram-se mais lábeis quando colocadas em meio alcalino do que nos demais
meios do estudo. Além disso, verificou-se (Figura 1), que o método
cromatográfico desenvolvido mostrou-se rápido (15 min), eficaz e com resolução
adequada para a avaliação simultânea destes fármacos, bem como dos produtos de
degradação gerados.
TABELA 1
Degradação hidrolítica e oxidativa das estatinas
(livre e nanoencapsulada).
FIGURA 1
Degradação hidrolítca dos fármacos livres (LV e SV)
e a geração dos seus respectivos produtos de
degradação.
CONCLUSÕES: O método cromatográfico desenvolvido mostrou ser simples, específico, linear,
preciso e exato para a determinação simultânea dos fármacos associados as NC. Além
disso, mostrou-se com uma adequada resolução para separação dos fármacos e seus
respectivos produtos de degradação. Através dos estudos de estabilidade constatou-
se que as NCSV são um pouco mais estáveis que o fármaco em sua forma livre. Além
disso, as NCSV e NCLV mostraram-se mais lábeis em meio alcalino. Com relação a
degradação oxidativa tanto as NC como os fármacos em sua forma livre, mostraram-se
com um baixo índice de degradação.
AGRADECIMENTOS: A Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul pela
bolsa PROBIC e a Pró-Reitoria de Pós-Graduação, Pesquisa e Extensão da UNIFRA.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: ALAM, M.I.; BEG, S.; SAMAD, A.; BABOOTA, S.; KOHLI, K.; ALI, J.; AHUJA, A.; AKBAR, M. Strategy for effective brain drug delivery. European Journal of Pharmaceutical Sciences, 40, n. 5, p. 385-403, 2010.
BRASIL. Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Resolução RE 899 de 29 de maio de 2003. Dispõem sobre o guia para validação de métodos analíticos e bioanalíticos. Diário Oficial da União, Brasília, 2003.
CHAUDHARI, B. G.; PATEL, N. M; SHAH, P. B. Stability-indicating reversed-phase liquid chromatography method for simultaneous determination of simvastatin and ezetimibe from their combination drug products.Journal of AOAC International, v. 90, n. 5, p. 124-1249, 2007
ICH – INTERNATIONAL CONFERENCE ON HARMONIZATION. Validation Of Analytical Procedures: Text And Methodology Q2(R1), 2005.
MOST, PETER J. VAN DER; DOLGA, AMALIA M.; NIJHOLT, INGRID M.; LUITEN, PAUL G.M.; EISEL, ULRICH L.M. Statins: Mechanisms of neuroprotection. Progress in Neurobiology, v. 88, n. 1, p. 64-75, 2009.
PETANCESKA, S.S.; DEROSA, S.; OLM, V.; DIAZ, N.; SHARMA, A.; THOMAS-BRYANT, T.; DUFF, K.; PAPPOLLA, M.; REFOLO, L.M. Statin therapy for Alzheimer's disease. Will it work? Journal of Molecular Neuroscience, v. 19, n. 1-2, p. 155-161, 2002.
UPADHYAYA, P.; SETH, V.; AHMAD, M. Therapy of Alzheimer's disease: An update, 4, n. 6, p. 408-421, 2010.
