Realizado no Rio de Janeiro/RJ, de 14 a 18 de Outubro de 2013.
ISBN: 978-85-85905-06-4
ÁREA: Química Analítica
TÍTULO: VALIDAÇÃO DE METODOLOGIA PARA DETERMINAÇÃO DE INTERFERENTES ENDÓCRINOS EM ÁGUA POR HPLC/DAD
AUTORES: Sousa, P.L.R. (UFRN) ; Araújo, S.A.M. (UFC) ; Becker, H. (UFC) ; Nascimento, R.F. (UFC) ; Araújo, G.M. (UFC)
RESUMO: Este trabalho tem como objetivo desenvolver uma metodologia para identificação e
análise de compostos emergentes em amostras de água por cromatografia líquida de
alta resolução acoplada a um detector de arranjo de diodos. Foram avaliados:
cafeína, ciprofloxacina, dietilestilbestrol, 17 α-etinilestradiol e 17 β-
estradiol. Como parâmetros de validação utilizou-se: linearidade, limite de
detecção, limite de quantificação, precisão e eficiência da extração em fase
sólida. Os testes de linearidade, LD, LQ e precisão mostraram bons resultados.
Na eficiência da extração em fase sólida verificou-se que a Ciprofloxacina teve
melhor resultado quando extraída em DVB e os demais compostos em HLB. Logo,
verificou-se que a metodologia desenvolvida é eficiente na identificação e
análise de IEs em água.
PALAVRAS CHAVES: Interferentes endócrinos; contaminantes emergentes; cromatografia (HPLC – DAD
INTRODUÇÃO: O uso de águas superficiais para tratamento e fornecimento para consumo humano,
e também como receptores de esgotos, tratados ou não, tem sido os principais
motivos de preocupação acerca da contaminação das fontes de água (RODRIGUEZ-
MOZAZ, 2004).
O aumento de sensibilidade na detecção de poluentes químicos e seus efeitos
biológicos, com o advento de novos métodos, têm chamado à atenção da comunidade
científica para os contaminantes que ainda não eram detectados ou considerados
de risco. Estes são denominados contaminantes emergentes, os quais têm uso no
dia-a-dia e ainda não são regulamentados como poluentes pela legislação (ALDA,
2003).
Neste contexto, o presente trabalho tem por objetivo desenvolver uma metodologia
para determinação de interferentes endócrinos em água utilizando HPLC - DAD.
MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados estrogênios (dietilestilbestrol, 17 α-etinilestradiol e 17 β-
estradiol) e fármacos (cafeína, ciprofloxacina). Os parâmetros utilizados para
validação do método foram: linearidade, limite de detecção, limite de
quantificação, precisão e eficiência da extração em fase sólida.
A linearidade foi avaliada pela resposta em função da concentração do analito. A
linearidade foi determinada pelo coeficiente de correlação (r2), obtido pelo
gráfico relacionando a resposta do equipamento em função de 7 concentrações do
analito.
Os limites de detecção (LD) e de quantificação (LQ) foram calculados a partir do
método baseado em parâmetros da curva analítica.
No estudo de extração dos compostos foram testados três cartuchos comerciais:
C18, HLB e DVB de 500 mg/6 mL cada. A extração foi realizada percolando 250 mL
de água Milli-Q fortificada com os cinco padrões para os cartuchos previamente
condicionados e o fluxo foi mantido em 2 mL/min durante toda a extração. As
amostras pré-concentradas foram injetadas em duplicatas no cromatógrafo líquido
(HPLC-DAD).
RESULTADOS E DISCUSSÃO: Na Tabela 1 observa-se que, dentro das faixas lineares estudadas, o método
analítico por HPLC-DAD atendeu as exigências da ANVISA, pois os valores dos
coeficientes de correlação (r2) foram superiores a 0,99.
O limite de detecção (LD) obtido pelo método na determinação simultânea dos
cinco interferentes endócrinos em estudo variou de 1,722 – 4,2477 μg/L, e o
limite de quantificação (LQ) variou de 6,168 – 14,256 μg/L.
A precisão do método cromatográfico empregado nesse trabalho foi avaliada por
meio da repetibilidade intradia. A Figura 1 apresenta os valores dos
coeficientes de variação para cada um dos compostos estudados.
Os coeficientes de variação foram inferiores a 5 % para todos os 5 compostos.
A Figura 2 apresenta os percentuais de recuperação dos cinco compostos estudados
nos diferentes cartuchos de extração testados.
O cartucho DVB apresentou resultados satisfatórios para a cafeína (98,6 %) e
para a cipro (62,9 %). No entanto, o cartucho HLB apresentou resultados de
recuperação satisfatórios para a cafeína (98,6%) e para os hormônios (E2, EE2 e
DES), porém, para o fármaco Cipro a recuperação foi insatisfatória (35,5 %).
Com os resultados de extração obtidos, optou-se por utilizar o cartucho DVB para
a extração da ciprofloxacina e o cartucho HLB para a extração da cafeína e dos
hormônios, 17β-estradiol, 17α-etinilestradiol e dietilestilbestrol.
Figuras 1 e 2
1.Teste de Repetibilidade para os cinco compostos.
2.Teste de recuperação empregando extração em fase
sólida em 3 diferentes cartuchos.
Tabela 1
Parâmetros de validação dos interferentes
endócrinos.
CONCLUSÕES: Com base no trabalho realizado, concluiu-se que as condições cromatográficas
testadas são adequadas para determinação dos compostos avaliados em água.
As curvas de calibração apresentaram excelentes coeficientes de correlação, assim
também como os limites de detecção (LD) e quantificação (LQ). Os valores para
precisão também foram satisfatórios, verificados através do coeficiente de
variação (CV).
Dos cartuchos avaliados, o DVB apresentou melhor percentual de recuperação para a
ciprofloxacina, e o cartucho HLB foi escolhido como para a extração dos outros
compostos.
AGRADECIMENTOS: Ao CNPq e FUNCAP pelo apoio financeiro e a UFC pela infraestrutura laboratorial
para realização das análises.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA: ALDA, M.J.L. de; DÍAZ-CRUZ, S.; PETROVIC, M.; BARCELÓ, D. Liquid chromatography – (tandem) mass spectrometry of selected emerging pollutants (steroid sex hormones, drugs and alkylphenolic surfactants) in the aquatic environment. Journal of Chromatography A. v. 1000, p. 503-523, 2003.
ANVISA; Agência Nacional de Vigilância Sanitária; Resolução - RE nº 475, de 19 de março de 2002.
RODRIGUEZ-MOZAZ, S.; ALDA, M.J.L. de; BARCELÓ, D. Monitoring of estrogens, pesticides and bisphenol A in natural waters and drinking water treatment plants by solid-phase extraction-liquid chromatography-mass spectrometry. Journal of Chromatography A. v. 1045, p. 85-92, 2004.