AVALIAÇÃO DO POTENCIAL BIOLÓGICO DE PRODUTOS NATURAIS

ISBN 978-85-85905-23-1

Área

Produtos Naturais

Autores

Melgaço, F. (IFRJ) ; Cherol, M. (IFRJ) ; Medeiros, B. (IFRJ) ; Marques, M. (IFRJ) ; Oliveira, A. (IFRJ)

Resumo

Frente a riqueza e diversidade de propriedades medicinais dos vegetais em aplicações farmacêuticas e ao problema da resistência bacteriana aos antimicrobianos disponíveis, foi preparado e utilizado extratos brutos de abóbora em testes para verificar atividade antimicrobiana. Bactérias foram mantidas em condições ideais e realizou-se antibiograma para verificar suscetibilidade microbiana, como padrão para comparação com o extrato. Para o extrato, o teste de citotoxicidade do eluente HCl foi efetuado, onde a concentração de [10][/-4] mol/L foi a a ideal a ser utilizada na avaliação antimicrobiana. A partir dos resultados obtidos, espera-se que atividades antibióticas do extrato de abóbora sejam eficazes e venham a contribuir para o processo de descoberta de novos antibióticos

Palavras chaves

produtos naturais; antimicrobiano; bactérias

Introdução

Antibióticos de origem natural ou seus derivados sintéticos estão disponíveis atualmente no mercado, podendo ser agrupados e classificados como β-lactâmicos, tetraciclinas, macrolídeos, entre outros.Aqueles que apresentam origem sintética são classificados em sulfonamidas, fluoroquinolonas e oxazolidinonas (Patrick, 1995; Pupo et al., 2006; Abraham, 2003). Devido ao uso excessivo e indiscriminado dos antibióticos diversos micro-organismos patogênicos estão se tornando cada vez mais resistentes, desta forma há a necessidade de se pesqueisar formas alternativas de tratamento(Brito & Cordeiro, 2012). Recentemente foi divulgada pela OMS uma lista de bactérias resistentes a todas as drogas disponíveis no mercado, classificadas de acordo com a urgência da necessidade de descoberta e produção de novos fármacos de atividade antimicrobiana (OPAS/OMS, 2017). A abóbora (Cucurbita pepo) pertence à família Cucurbitaceae, no Brasil, existem cerca de 30 gêneros e 200 espécies constituintes dessa família (Ferreira et al., 2006).A hortaliça já foi pesquisada quanto a propriedades de suas sementes, polpa e folhas, as quais possuem substâncias com alto potencial biotecnológico, como anti-helmíntico, bactericida, diurético, anti-inflamatório, entre outros (Silva et al., 2003; Lima et al, 2006; Lima e Lopes, 2008). Entretanto, alguns estudos com seus extratos etanólicos demonstraram-se pouco efetivos (Espitia-Baena et al., 2011; Farias, 2012). Acredita-se então, que outros extratos podem ainda ser investigados quanto a atividade biológica desse vegetal, o objetivo desse trabalho foi preparar e utilizar extrato bruto de casca de abóbora para realização e avaliação de testes para fins biotecnológicos.

Material e métodos

Avaliação de sensibilidade As bactérias gram negativas Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa e Serratia marcescens foram mantidas em meios de manutenção líquidos (caldo Luria Bertani) e sólidos (ágar nutriente), em estufa bacteriológica a 37oC. A fim de ter um resultado padrão de comparação da inibição de crescimento das culturas, foi realizado levantamento bibliográfico para verificar quais antibióticos, disponíveis no mercado, apresentariam sensibilidade nas bactérias estudadas. Então, antibiograma foi realizado com os antibióticos ciprofloxacina (apenas para P. aeruginosa) e gentamicina (para todas as bactérias analisadas) através do método de disco-difusão. Testes de sensibilidade a antimicrobianos por disco-difusão usando a gentamicina mostram que: “sem halo de inibição indica resistência bacteriana e halos ≥ 10 mm indicam ausência de alto grau de resistência” e para ciprofloxacina é considerado sensível formação de halos acima de 21 mm. Teste de citotoxicidade Para o preparo do extrato de abóbora, descascou-se e torrou-se a casca em estufa na temperatura de 230°C e em seguida, triturou-se em liquidificador até o ponto de pó. Então foi realizada a avaliação do teste de citotoxicidade do eluente HCl, foi preparada a solução de 0.1 mol/L e filtrada, afim de se garantir a esterilidade. A partir desta solução realizou-se sete diluições seriadas. Em placas contendo meio ágar Müller Hinton, com os inóculos bacterianos, colocou-se 8 discos em pontos equidistantes impregnados com concentrações de 10-1mol/L a 10-9mol/L das soluções de HCl preparadas. O grau de citotoxicidade foi avaliado pela medida (mm) do diâmetro da zona de inibição formado ao redor do disco após 24 horas na estufa bacteriológica.

Resultado e discussão

Os testes de suscetibilidade bacteriana para gentamicina (10 μg) mostrou os seguintes halos de inibição: ≤ 10 mm para K. pneumoniae; ≤ 20 mm para P. aeruginosa e ≥ 21 mm para S. marcescens mostrando que tanto a S. marcescens quanto a P. aeruginosa são sensíveis a gentamicina. O resultado da sensibilidade a ciprofloxacina (5 μg) para P. aeruginosa, produziu halos ≥ 28 mm (Figura 1). Os valores de halos obtidos demonstram que a bactéria P. aeruginosa também mostrou suscetibilidade ao antibiótico ciprofloxacina. Os resultados dos testes de sensibilidade dos antibióticos comerciais obtidos corroboram com o descrito pela ANVISA (2008) como resultados padrão de sensibilidade para cada um dos testados e serão importantes na comparação e verificação de atividade antimicrobiana dos extratos. Na avaliação do teste de citotoxicidade do eluente foi observado que a concentração de 10-4 mol/L foi a ideal para ser utilizada na avaliação antimicrobiana do extrato (Figura 2). Nesta concentração não foi observada inibição do crescimento das bactérias por disco-difusão quanto ao eluente (HCl), assim apenas a atividade do extrato que será conduzida e analisada nos testes de avaliação antimicrobiana. Em testes de sensibilidade onde há um eluente presente no extrato que possa vir a comprometer os resultados inibindo por citotoxicidade é importante que os mesmos sejam testados separadamente de seu extrato para verificar em qual concentração não se altera os resultados, resultados semelhantes aos apresentados por Farias, 2012 onde o eluente etanol 70% é testado em uma cepa controle para avaliar se ocorreria halos de inibição.

Tabela de teste de sensibilidade


Tabela de teste de citotoxicidade

Conclusões

A preparação do extrato foi efetuada com sucesso e as avaliações de atividades antibióticas estão sendo realizadas, tomando-se o cuidado para que a toxicidade do eluente não interfira na atividade do extrato. A busca por fontes naturais e os estudos de bioprospecção de extratos vegetais na produção de fármacos vem contribuir para o processo de descoberta de novos antibióticos, de grande importância no cenário atual, em que existe o rápido desenvolvimento de resistência bacteriana aos agentes terapêuticos disponíveis.

Agradecimentos

Referências

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