Avaliação da atividade anti-T. cruzi de uma série de tiazóis derivados da isatina

ISBN 978-85-85905-25-5

Área

Química Orgânica

Autores

Freitas, L.A.B. (UFPE) ; Silva, G.C. (UFPE) ; Ramos, C.G.C. (UFPE) ; Santos, I.R. (UFRPE) ; Melo, V.G. (UFPE) ; Souza, F.A. (UFPE) ; Gomes, P.A.T.M. (UFPE) ; Santos, A.C.S. (FIOCRUZ) ; Pereira, V.R.A. (FIOCRUZ) ; Leite, A.C.L. (UFPE)

Resumo

A doença de Chagas é uma infecção causada pelo protozoário Tripanossoma cruzi e tem grande incidência na América Latina. O fármaco atualmente utilizado é o benzonidazol e não é eficaz nas fases mais avançadas da doença. Diante desse problema, foi sintetizada uma série de dez compostos e avaliada quanto a atividade anti-T. cruzi. Foram identificados os compostos LAB- 1N, LAB-1J, LAB-1M e LAB-1F com promissores valores de IC₅₀ de 1,62; 2,05; 4,12 e 4,43 M, respectivamente. Estes compostos obtiveram IC₅₀ menores quando comparados com o fármaco de referência (14,60 μM). Foram encontrados altos valores de IS, com destaque para LAB-1N (IS=50,80). Os resultados foram promissores tendo em vista a potencial atividade tripanocida dos compostos.

Palavras chaves

Doença de Chagas; Trypanosoma cruzi; Tiazóis

Introdução

Doenças negligenciadas são um conjunto de doenças infecciosas que afetam países em desenvolvimento. Dentre as doenças negligenciadas, destaca-se a Doença de Chagas, que é uma infecção parasitária causada pelo Trypanosoma cruzi. Atualmente, estima-se cerca de 10 milhões de pessoas infectadas pelo Trypanosoma cruzi, em todo o mundo, principalmente na América Latina (WHO, 2019). O fármaco atualmente utilizado para o tratamento da doença de Chagas é o benzonidazol, mas o tratamento não é eficaz em estágios mais avançados da doença. Devido sua alta toxidade para as células de mamíferos e consequentes efeitos colaterais, a administração do medicamento não pode ultrapassar o tempo de dois meses. Fato este que evidencia a necessidade de desenvolvimento de novos medicamentos para o tratamento a sua terapêutica (BRASIL, 2015). As isatinas têm se mostrado muito interessantes por apresentar diversas comprovações de atividades biológicas, destacam-se os anticonvulsivantes, antibacterianas, antifúngicas, antivirais e antichagásicas. Os tiazol é um importante núcleo farmacofórico com um amplo espectro de atividades biológicas relatadas, destacando-se a potente ação citotóxica e a anti-T. cruzi (ABOUL-FADL et al., 2012). Sabendo-se que o T.cruzi é susceptível aos tiazóis, como também ao heterocíclico isatina, esse trabalho teve como objetivo sintetizar uma série de inéditos tiazóis derivados da isatina e avaliar quanto às propriedades anti-T.cruzi.

Material e métodos

Foram sintetizados dez inéditos tiazóis em duas etapas. Na primeira foi obtida a tiossemicarbazona intermediária. Na segunda etapa, a tiossemicarbazona foi ciclizada com diferentes α-halo-cetonas, obtendo-se os dez tiazóis. Todos os compostos foram caracterizados por diferentes técnicas de espectroscopia (RMN de ¹H, RMN de ¹³C e Massas de Alta Resolução). A citotoxicidade em células de mamíferos foi avaliada através de ensaios com MTT, no qual macrófagos da linhagem RAW 264.7 foram plaqueados em placas de 96 poços e incubados por 24h. Após esse tempo, os compostos foram adicionados nas concentrações de 6 a 200 µg/mL e incubados novamente por um período de 48h. Após a incubação foi acrescentado 25 µL de MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5- brometo-difenil-tetrazóico). Foi realizada a leitura da absorbância a 570 nm no espectrofotômetro Thermo Scientific Multiskan FC. A concentração citotóxica para 50% da cultura (CC₅₀) foi determinada por análise de regressão pelo software GraphPad Prism. Cada ensaio foi realizado em triplicata. Para a análise anti-T. cruzi, as formas tripomastigotas foram obtidas a partir da infecção in vitro da linhagem de células Vero. Para determinar o efeito anti-proliferativo para formas tripomastigotas da cepa Y foram semeadas em placas de 96 poços, juntamente com diferentes concentrações dos compostos (0,19; 1,56; 6,25; 25; 100 µg/mL). O controle negativo da reação foi obtido em poços sem tratamento e a droga de referência utilizada como controle positivo foi o benzonidazol. A viabilidade parasitária foi determinada por contagem direta em câmara de Neubauer e, a partir desses valores, foi obtida a IC₅₀ por meio de uma regressão linear utilizando o software Prisma 5.0 Graphpad.

Resultado e discussão

Após a síntese, a estrutura química dos compostos foi confirmada através de dados obtidos por espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de ¹H, espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear de ¹³C, e espectrometria de massas de alta resolução (EMAR). Os valores obtidos de Coeficiente de Inibição (IC₅₀), Citotoxicidade (CC₅₀) e Índice de Seletividade (IS), para os 10 compostos finais, estão descritos na Tabela 1. De todos os compostos testados, apenas os compostos LAB-1I e LAB-1H foram citotóxicos em doses inferiores à 50 µM, os demais apresentaram citotoxicidade bem acima desse valor. Com relação à atividade anti-T. cruzi, com exceção dos compostos LAB-1L, LAB-1F e LAB- 1H, os demais compostos apresentaram valores de IC₅₀ menores que 50 µM para a forma tripomastigota (forma presente na corrente sanguínea do hospedeiro humano). Os compostos LAB-1E (IC₅₀ = 4,43 µM), LAB-1M (IC₅₀ = 4,12 µM), LAB-1J (IC₅₀ = 2,05 µM) e LAB-1N (IC₅₀ = 1,72 µM), apresentaram melhores valores de IC₅₀, demonstrando serem mais ativos para a forma tripomastigota, quando comparados com o benznidazol (IC₅₀ = 14,60 µM). Os resultados desse trabalho indicam que derivados isatina-tiazóis são importantes candidatos a fármacos antichagásicos.

Conclusões

Após a síntese e a avalição da atividade anti-T. cruzi, foram identificados os compostos LAB-1N, LAB-1J, LAB-1M e LAB-1F com promissores valores de IC50 de 1,62; 2,05; 4,12 e 4,43 µM, respectivamente. Os altos valores de IS, em destaque o LAB-1N (IS=50,80,22), encontrados na maioria dos compostos sintetizados, mostram que nossos compostos oferecem um direcionamento mais eficiente para o parasito do que para as células de mamíferos, o que os torna bastante promissores tendo em vista sua propriedade tripanocida.

Agradecimentos

À FACEPE e ao CNPq.

Referências

ABOUL-FADL, T.; RADWAN, A. A.; ATTIA, M. I.; AL-DHFYAN, A.; ABDEL-AZIZ, H. A. Schiff bases of indoline-2,3-dione (isatin) with potential antiproliferative activity. Chemistry Central Journal, v. 6, p. 49, 2012.
BRASIL, Ministério da Saúde - Secretaria de Vigilancia e Saúde. Doença de Chagas aguda no Brasil: série histórica de 2000 a 2013; Boletim Epideiológio, vol 46, nº 21, 2015.
WHO - World Health Organization; Chagas Disease (American trypanosomiasis). 17 April 2019. Disponível em: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs340/en/.; Acesso em: 16.08.2019.