Autores
Stelle, Y. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA (UEPG)) ; Cruz, T.M. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA (UEPG)) ; Gonçalves, L. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA (UEPG)) ; Granato, D. (UNIVERSITY OF LIMERICK) ; Marques, M.B. (UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA (UEPG))
Resumo
O objetivo desse estudo foi avaliar o potencial antioxidante e anti-hemolítico
do extrato hidroalcoólico de folhas de Paubrasilia echinata e identificar
parcialmente a composição química, quantificando teores de compostos fenólicos
totais (CFT), flavonoides totais (FT) e clorofila total (CT). Avaliou-se a
inibição do radical DPPH, a capacidade de redução de ferro (FRAP), capacidade
redutora total (CRT) e quelação de metais de transição (Fe2+ e Cu2+)
caracterizando atividades antioxidantes. O extrato apresentou elevado teor de
compostos fenólicos totais, os quais foram significativamente correlatos aos
ensaios de DPPH e FRAP, reafirmando a capacidade antioxidante dessa classe de
compostos. Os resultados também indicaram atividade anti-hemolítica do extrato
frente a eritrócitos fragilizados.
Palavras chaves
Paubrasilia echinata; Antixodante; Hemólise
Introdução
O Pau-Brasil, árvore símbolo do país que carrega parte de seu nome, foi
renomeado de Caesalpinia echinata para Paubrasilia echinata devido a diferenças
morfológicas e genéticas (GAGNON et al., 2016). Foi muito explorado durante a
colonização portuguesa, correndo o risco de ser extinto se não forem efetivadas
e intensificadas as propostas de preservação (MARQUES; BORGES, 2020).
Sua intensiva exploração se deveu, principalmente, à resistência da madeira e à
coloração vermelha da resina. A madeira foi utilizada na produção de
instrumentos musicais e fabricação de móveis, ao passo que a resina foi
empregada como corante na indústria têxtil. A cor avermelhada decorre da
presença do produto da oxidação da brasilin, a brasileína, ambos fenólicos e
exercem atividade antioxidante (AGUIAR; PINHO,1986; REZENDE et al., 2004; GOMES
et al., 2014; MARQUES; BORGES, 2020).
Suas aplicações mais usuais na medicina popular incluem ação cicatrizante e
tratamento de diarreias e disenteria. Há relatos versando sobre atividades anti-
inflamatórias, antifúngicas, antitumorais, antimicrobianas e antioxidantes
(GOMES et al., 2014; GRANJEIRO, 2009; SHEN et al., 2007).
Na literatura, existem poucos relatos sobre extratos de folha de Paubrasilia
echinata, menos ainda os que avaliam a atividade antioxidante e composição
química. Por isso, esse trabalho teve como objetivo estudar e avaliar o
potencial antioxidante, composição química e atividade anti-hemolítica de
extrato hidroalcoólico de folhas de Pau-Brasil.
Material e métodos
As folhas de Pau-Brasil foram coletadas em julho/2021 de um espécime em Ponta
Grossa – Paraná (25º04’39.3’’S 50º11’15.4’’W), a amostra foi seca à temperatura
ambiente e triturada. Os extratos foram obtidos por infusão, em uma mistura de
50% etanol e 50% água ultrapura.
Para a composição química, foram quantificados: flavonoides totais (FT) (HERALD
et al., 2012), compostos fenólicos totais (CFT) (MARGRAF et al., 2015) e teor de
clorofila total (CT) (PARNIAKOV et al., 2015).
A capacidade antioxidante foi avaliada através dos ensaios de: sequestro do
radical DPPH (2,2-difenil-2-picrilhidrazil) (BRAND-WILLIAMS et al., 1995), FRAP
(Capacidade de redução do Ferro) (GRANATO et al., 2015), quelação de Fe2+ e Cu2+
(SANTOS et al., 2017), e Capacidade Redutora Total (CRT) (BERKER et al., 2013).
Para determinação da atividade anti-hemolítica, eritrócitos de amostras
sanguíneas do tipo O+, fornecidas pelo HUCG-UEPG, foram isolados por lavagens
consecutivas em tampão (PBS 5 mmol/L, NaCl 154 mmol/L, pH 7,4), centrifugados a
700xg por 10 minutos até obtenção de sobrenadante límpido, o hematócrito foi
posteriormente ressuspenso e diluído até 12,5%. Os eritrócitos isolados foram
submetidos a condições isotônicas e hipotônicas, na presença e ausência do
extrato hidroalcoólico, com a absorbância acompanhada em 540 nm (ZHANG et al.,
2019).
Todos as análises foram realizadas em triplicata, com os resultados expressos em
média ± desvio padrão. Os testes de Brown-Forsythe, ANOVA e matrizes de
correlação de Pearson foram conduzidos para relacionar estatisticamente
composição química, atividade antioxidante e bioatividades dos extratos
(software Statistica® v. 13.3).
Resultado e discussão
Os resultados obtidos foram expressos em massa de padrão equivalente por grama
de extrato, podendo ser observados na Tabela 1, abaixo. O extrato hidroalcoólico
obteve um rendimento de 8,27%. Quanto à composição química, CFT foi de 238,12
mgAGE/g, sendo maior que o teor obtido para um extrato etanólico 80% de folhas
de Bauhinia forficata L. (217,29 mg AGE/g), da mesma família da Paubrasilia
echinata (MICELI et al., 2016). O valor de FT obtido foi de 78,48 mg CE/g e CT
de 4,83 mg/g. A clorofila pode atuar antagonicamente aos compostos
antioxidantes pois pode se comportar como pró-oxidante e, por ser um cromóforo,
pode interferir nas análises espectroscópicas.
Quanto às análises de atividade antioxidante por redução, o extrato
hidroalcoólico apresentou 480 mg AAE/g para DPPH, 380,61 mg AAE/g para FRAP e
149,5 mg QE/g para CRT. Para quelações de metais de transição, os resultados
foram 8,84 mg EDTAE/g para quelação de Fe2+ e 190,46 mg EDTAE/g para quelação de
Cu2+. O teor de CFT foi significativamente correlato (p ≤ 0,05) às análises de
DPPH e de FRAP, corroborando com o fato dessa classe de compostos apresentar
atividade antioxidante.
O extrato demonstrou potencial ação anti-hemolítica em condições hipotônicas. O
H50, onde há 50% da hemólise, foi menor e estatisticamente diferente do
controle, na ausência do extrato, sendo equivalente a 0,428% de NaCl para o
extrato e 0,490% para o controle.
Conclusões
Com esse trabalho foi possível concluir que as folha de Paubrasilia echinata, mais
especificamente o extrato delas obtido, possui elevado potencial antioxidante
agregada à atividade de proteção à hemólise. Também foi possível correlacionar
estatisticamente a atividade antioxidante à presença dos compostos fenólicos. Por
fim, como são escassos os relatos de bioatividade das folhas do Pau-Brasil, há
demanda de uma ampla pesquisa de grande importância farmacológica e ecológica para
a preservação dessa espécie.
Agradecimentos
Aos órgãos de fomento, CAPES e CNPq, à Universidade Estadual de Ponta Grossa, ao
Hospital Universitário Regional Wallace Thadeu de Mello e Silva, ao Programa de
Pós-Graduação em Química da UEPG e à equipe do LAQUA.
Referências
AGUIAR, F.A.; PINHO, R.A. 1986. Pau-brasil: Caesalpinia echinata Lam. Folheto 18, Instituto de Botânica, São Paulo.
BERKER, K. I.; OLGUN, F. A. O.; OZYURT, D.; DEMIRATA, B.; APAK, R. Modified Folin-Ciocalteu antioxidant capacity assay for measuring lipophilic antioxidants. Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 61, n. 20, p. 4783–4791, 2013.
BRAND-WILLIAMS, W.; CUVELIER, M.E.; BERSET, C.L.W.T. Use of free radical method to evaluate antioxidant activity. Food Science Technology Letters, v. 28, n. 1, p. 25-30, 1995.
GAGNON, E.; BRUNEAU, A.; HUGHES, C. E.; DE QUEIROZ, L. P.; LEWIS, G. P. A new generic system for the pantropical Caesalpinia group (Leguminosae). Phytokeys, Bulgaria, v. 1, n. 71, p.1-161, 2016.
GOMES, E. C. B. S.; JIMENEZ, G. C.; DA SILVA, L. C. N.; DE SÁ, F. B.; DE SOUZA, K. P. C.; PAIVA, G. S.; DE SOUZA, I. A. Evaluation of Antioxidant and Antiangiogenic Properties of Caesalpinia echinata Extracts. Journal of Cancer, v. 5, p. 143-150, 2014.
GRANATO, D.; KARNOPP, A. R.; VAN RUTH, S. M. Characterization and comparison of phenolic composition, antioxidant capacity and instrumental taste profile of juices from different botanical origins. Journal of the Science of Food and Agriculture, v. 95, n. 10, p. 1997–2006, 2015.
GRANJEIRO, A. R. S. Avaliação do potencial toxicológico e farmacológico das folhas de Caesalpinia echinata Lam. Dissertação de Mestrado. (Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2009.
HERALD, T. J.; GADGIL, P.; TILLEY, M. High-throughput micro plate assays for screening flavonoid content and DPPH-scavenging activity in sorghum bran and flour. Journal of the Science of Food and Agriculture, v. 92, n. 11, p. 2326–2331, 2012.
MARGRAF, T.; KARNOPP, A.R.; ROSSO, N.D.; GRANATO, D. Comparison between Folin-Ciocalteu and Prussian Blue assays to estimate the total phenolic content of juices and teas using 96-well microplates. Journal of Food Science, v. 80, n. 1, p. 2397-2403, 2015.
MARQUES, E. O.; BORGES, D. C. S. A importância da Educação Ambiental na preservação do Pau-Brasil - Paubrasilia echinata. Scientia Generalis, Minas Gerais, v. 1, n. 1, p. 60-70, 2020.
MICELI, N.; BUONGIORNO, L. P.; CELI, M. G.; CACCIOLA, F.; DUGO, P.; DONATO, P.; MONDELO, L.; BONACCORSI, I.; TAVIANO, M. F. Role of the flavonoid-rich fraction in the antioxidant and cytotoxic activities of Bauhinia forficata Link. (Fabaceae) leaves extract. Natural Product Research, v. 30, n. 11, p. 1229-1239, 2016.
PARNIAKOV, O.; APICELLA, E.; KOUBAA, M.; BARBA, F. J.; GRIMI, N.; LEBOVKA, N.; PATARO, G.; FERRARI, G.; VOROBIEV, E. Ultrasound-assisted green solvent extraction of high-added value compounds from microalgae Nannochloropsis spp. Bioresource Technology, v. 198, p. 262–267, 2015.
REZENDE, C. M.; CORRÊA, V. F.; COSTA, A. V.; CASTRO, B.; ALVES, R. J. Constituintes químicos voláteis das flores e folhas do Pau-Brasil. Química Nova, Rio de Janeiro, v. 27, n. 3, p. 414-416, 2004.
SANTOS, J. S.; BRIZOLA, V. R. A.; GRANATO, D. High-throughput assay comparison and standardization for metal chelating capacity screening: A proposal and application. Food Chemistry, v. 214, n. 1, p. 515–522, 2017.
SHEN, J.; ZHANG, H.; LIN, H.; SU, H.; XING, D.; DU, L. Brazilein protects the brain against focal cerebral ischemia reperfusion injury correlating to inflammatory response suppression. European Journal of Pharmacology, v. 558, p. 88-95, 2007.
ZHANG, L.; SANTOS, J. S.; CRUZ, T. M.; MARQUES, M. B.; CARMO, M. A. V.; AZEVEDO, L.; WANG, Y.; GRANATO, D. Multivariate effects of Chinese keemun black tea grades (Camellia sinensis var. sinensis) on the phenolic composition, antioxidant, antihemolytic and cytotoxic/cytoprotection activities. Food Research International, v. 125, n. 1, p. 108516, 2019.
