Autores
Oliveira, M.S.C. (UECE) ; Rodrigues, L.A. (UECE) ; Cavalcante, T.R. (UECE) ; Araújo, J.I.F. (RENORBIO/UECE) ; Rocha, Y.M. (UECE) ; Campos, A.R. (UNIFOR) ; Magalhães, F.E.A. (UECE)
Resumo
O peixe Zebrafish (Danio rerio), é muito usado predominantemente na biologia e na
genética molecula. Avaliar a toxicidade de um produto químico, é essencial para
identificar os parâmetros toxicológicos e suas relações dose-resposta. Para tal
avaliação foi utilizado o extrato etanólico de cascas de Jambo vermelho - EEJV
(Syzygium malaccensis) frente o zebrafisch em teste de toxicidade e mortalidade.
Diante dos resultados obtidos in vivo frente ao vertebrado Zebrafish (Danio rerio)
adulto, o EEJV mostrou-se bastante tóxico, pois houve mortalidade em todos os
grupos testados nas primeiras 24 horas de exposição. Algo já confirmado na
literatura, pois as substâncias presentes no extrato, como as antocianinas (cor
vermelho púrpura do jambo) possuem elevada ação tóxica.
Palavras chaves
JAMBO; ZEBRAFISH; TOXICIDADE
Introdução
Os animais utilizados mais frequentemente nas pesquisas biológicas são os
roedores; em torno de 95% dos estudos experimentais são feitos com camundongos e
ratos. Recentemente, um novo vertebrado foi introduzido, e com êxito, no cenário
científico: o zebrafish (ZF) conhecido também como paulistinha ou peixe-zebra. É
um pequeno teleósteo (3 a 4 cm), da espécie Danio rerio, tropical de água doce,
que nos últimos anos vem atraindo a atenção da comunidade científica. As
principais justificativas para isso decorrem de os peixes serem de pequeno
porte, de manutenção fácil, econômicos para criação, com alta taxa reprodutiva,
com seu genoma sequenciado e apresentarem importante homologia com os mamíferos.
Constituem excelente modelo experimental para estudos comportamentais,
genéticos, toxicológicos e para desvendar o mecanismo de diversas doenças
humanas bem como testar novos agentes terapêuticos, Lieschke; Currie (2007).
Logo o peixe Zebrafish tornou -se um importante modelo na área de investigação
toxicológica, onde procura-se identificar os efeitos adversos de compostos.
Assim, o uso do Danio rerio é considerado modelo promissor segundo Resende e
Soccol (2015), além de apresentar algumas vantagens em relação aos modelos
mamíferos como manutenção de baixo custo, prática e experimentação executável em
espaços reduzidos (de Campos et al., 2016).
O Jambo vermelho (Syzygium malaccensis, (L.) Merryl & Perry) pode ser consumido
in natura, em forma de compotas, doce em massa, geleias, licores e aguardente e
ainda pode ser utilizado para a produção de corante e antioxidante natural para
uso em vários segmentos da indústria (kurosawa, 2008).
Material e métodos
Para a preparação dos extratos foram utilizadas em média 42,36 gramas de cascas
de jambos vermelhos, sendo colocadas na estufa a 55°C/ 1h10min, em média, para
serem secas e posteriormente ser imersas em 212 mL de etanol por 14 dias, sendo
após este período, obtido 200 ml de extrato (EEtCJ), sendo 125 ml do conteúdo
levado para ser rotaevaporado e o restante do conteúdo sendo utilizado para a
análise fitoquímica segundo metodologias descritas em publicações especializadas
(Matos, 2009).
Os animais utilizados no experimento foram obtidos através do fornecedor
Agroquímica: Comércio de Produtos Veterinários LTDA. No Núcleo de Biologia
Experimental da Universidade de Fortaleza – NUBEX/UNIFOR foi feito a manipulação
e aclimatação dos animais, onde os animais foram mantidos em aquário de vidro
com temperatura de 24ºC, com água da torneira tratada com anticloro da marca
ProtecPlus® . Os procedimentos do experimento foram aprovados pelo Comitê de
Ética para o Uso de Animais (CEUA), sob o protocolo nº 05299177/2021, da
Universidade Estadual do Ceará (UECE).
Para realização do teste de toxicidade de 96h, nos ZFas (n=8/grupo) foram
aplicados, em cinco grupos, extratos etanólicos da casca de jambo vermelho e, em
um grupo, veículo (solução salina 0,9%). Um grupo de animais sem tratamentos
foi incluído (Naive). Após 1 hora dos tratamentos via intraperitoneal, cada
grupo foi colocado em aquários para que pudesse ser feito a observação da
análise de mortalidade (EKAMBARAM, PERUMAL & PAVADAI, 2017). O grupo de animais
tratados com solução salina (veículo; 0,9%) foi usado como controle. Após 96 h,
os valores obtidos com o número de ZFa mortos foram submetidos à análise
estatística, estimando-se a concentração letal para matar 50 % (CL50) de ZFa.
Resultado e discussão
No teste de toxicidade in vivo frente ao vertebrado Zebrafish (Danio rerio)
adulto, o extrato se mostrou tóxico, pois houve mortalidade em todos grupos
testados (Tabela 1). A mortalidade foi efetivada logo nas primeiras 24 horas em
todas as concentrações do extrato (CL50 = 1,47 mg/mL), fato já relatado por
Magalhães et al (2017), em seus estudos preliminares sobre o Zebrafish como
modelo
biológico de análise. Na Figura 1, apresentamos o teste de mortalidade em
diferentes concentração do extrato. Já na Figura 1 mostramos a evolução
diminuída
do desenvolvimento peixe e o aparecimento de lesões provavelmente no fígado e
baço do animal, mostrando assim a elevada toxicidade do extrato. Fato esse que
não interfere no consumo in natura do fruto de jambo, pois as substâncias
antioxidantes presentes no fruto em um total, ajudam a combater radicais livres
presentes nas células. Já o extrato das cascas de jambo (ECCJ) como é
proveniente de uma extração etanólica, torna-se tóxico ao consumo humano, fato
comprovado pelo experimento com o zebrafish.
Conclusões
De acordo com o protocolo utilizado no experimento, concluimos que nosso extrato é
bastante tóxico, de acordo com a mortalidades dos animais, com isso pesquisas
posteriores serão implantadas para produção de um fármaco com essa funcionalidade.
Agradecimentos
Ao Núcleo de biologia experimental (NUBEX) da Universidade de Fortaleza - UNIFOR,
pela disponibilidade para as análise toxicológicas.
Referências
DE CAMPOS, E. G. (2016). Zebrafish como organismo modelo para análises de efeitos comportamentais e toxicológicas da cetamina empregando cromatografia em fase gasossa e estatística multivariada. 72p. Dissertação: Mestrado em Ciências: Área Química. Universidade de São Paulo, Faculdade de Filosofia Ciências e Letras de Ribeirão Preto, Ribeirão Preto, São Paulo, Brasil.
EKAMBARAM, S. P.; PERUMA, S. S.; PAVADA, S.; Anti-inflammatory effect of Naravelia zeylanica DC via suppression of inflammatory mediators in carrageenan-induced abdominal o edema in zebrafish model. Inflammopharmacol. Doi:10.1007/s10787-016-0303-2
KUROSAWA, C. Jambo-Vermelho. Disponível em: Acesso em: 04 maio 2008.
LIESCHKE, J.G.; CURRIE, P.D. "Animal models of human disease: Zebrafish swim into view". Nature Reviews-Genetics, Vol. 8, no.5. 2007.
MAGALHÃES, F.E.A et al.; Adult zebrafish (Danio rerio): an alternative behavioral model of
Paulo, Brasil.
MATOS, F. J. D. A. Introdução à fitoquímica experimental. Fortaleza: edições UFC, 2009.
RESENDE, R. R.; SOCCOL, C. R. Biotecnologia aplicada à saúde: fundamentos e aplicações. Vol. 1, São Paulo: Editora Edgard Blücher Ltda., 2015.
